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白藜芦醇预处理人脐带间质干细胞的外泌体对非小细胞肺癌的作用及机制研究

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第一章 绪论

1.1 脐带间质干细胞

1.1.1 脐带间质干细胞概述

1.1.2 脐带间质干细胞的生物功能

1.2 白藜芦醇与脐带间质干细胞

1.2.1 白藜芦醇简介

1.2.2 白藜芦醇的生物功能

1.2.3 白藜芦醇对脐带间质干细胞的影响

1.3 外泌体

1.3.1 外泌体的分离和鉴定

1.3.2 外泌体的生物学功能

1.3.3 增强外泌体生物学功能的方法

1.4 人脐带间质干细胞外泌体

1.4.1 人脐带间质干细胞外泌体在体内的分布

1.4.2 人脐带间质干细胞外泌体的生物功能

1.5 肺癌与Wnt/β-catenin信号通路

1.5.1 Wnt/β-catenin信号通路与肺癌

1.5.2 DKK3与肺癌

1.6 科学问题的提出

第二章 研究目的、方法、方案设计和意义

2.1 研究目的

2.2 研究内容

2.3 研究方法

2.4 研究方案设计

2.4.1 白藜芦醇对人脐带间质干细胞生物特性的影响

2.4.2 Res-hucMSC-Ex的分离、鉴定及对肺癌的作用

2.4.3 Res-hucMSC-Ex对肺癌信号通路的影响

2.4.4 筛选Res-hucMSC-Ex抑制肺癌转移的关键分子

2.4.5 Res-hucMSC-Ex DKK3表达缺陷对肺癌的影响

2.5 研究意义

第三章 白藜芦醇对人脐带间质干细胞生物特性的影响

3.1 所用试剂、耗材与仪器

3.1.1 主要试剂、耗材

3.1.2 主要仪器

3.2 实验方法

3.2.1 磷酸盐缓冲液配制

3.2.2 HucMSCs的分离、培养

3.2.3 HucMSCs表面标记检测

3.2.4 Res的配制

3.2.5 HucMSCs成骨成脂诱导分化

3.2.6 CCK8实验

3.2.7 克隆形成实验

3.2.8 Luminex实验

3.2.9 RNA提取

3.2.10 逆转录

3.2.11 qRT-PCR

3.2.12 ELISA实验

3.2.13 细胞免疫荧光实验

3.2.14 细胞总蛋白提取

3.2.15 细胞核浆蛋白提取

3.2.16 Western blot

3.2.17 统计学分析

3.3 实验结果

3.3.1 HucMSCs的鉴定

3.3.2 Res促进hucMSC增殖、分化,抑制炎症因子表达

3.3.3 Res通过抑制Wnt/β-catenin信号通路促进hucMSCs增殖及成骨成脂分化

3.4 讨论

第四章 白藜芦醇预处理人脐带间质干细胞的外泌体对非小细胞肺癌的作用

4.1 材料与方法

4.1.1 主要细胞和试剂

4.1.2 主要仪器、耗材

4.2 实验方法

4.2.1 Res预处理hucMSCs上清收集

4.2.2 Res预处理hucMSCs来源的外泌体的提取

4.2.3 外泌体检测

4.2.4 GFP-A549细胞构建及外泌体摄取

4.2.5 Transwell迁移实验

4.2.6 实时无标记细胞分析(RTCA)系统

4.2.7 小鼠肺癌模型构建及治疗

4.2.8 小鼠肺癌组织HE染色

4.2.9 CCK8实验检测肺癌细胞增殖

4.2.10 流式细胞仪检测细胞凋亡

4.2.11 统计学分析

4.3 实验结果

4.3.1 外泌体的鉴定及膜电位检测

4.3.2 Res-hucMSC-Ex抑制肺癌转移

4.3.3 Res-hucMSC-Ex不影响肺癌细胞增殖、凋亡

4.4 讨论

第五章 Res-hucMSC-Ex转运DKK3失活Wnt/β-catenin信号通路抑制肺癌转移

5.1 试剂、耗材与仪器

5.1.1 试剂或耗材

5.1.2 实验仪器

5.2 实验方法

5.2.1 高效液相色谱法(HPLC)

5.2.2 Western blot

5.2.3 细胞免疫荧光

5.2.4 免疫组织化学染色

5.2.5 Transwell迁移实验

5.2.6 荧光定量PCR技术

5.2.7 ELISA实验

5.2.8 Nanosight可视型纳米颗粒分析仪检测外泌体数量

5.2.9 慢病毒干扰载体构建

5.2.10 DKK3敲减细胞株构建

5.2.11 DKK3敲减hucMSC外泌体提取

5.2.12 小鼠肺癌转移模型构建及治疗

5.2.13 组织HE染色

5.2.14 统计学分析

5.3 实验结果

5.3.1 Res-hucMSC-Ex对肺癌炎症相关的信号通路无明显影响

5.3.2 Res-hucMSC-Ex拮抗Wnt/β-catenin信号通路抑制肺癌转移

5.3.3 Res促进hucMSC-Ex富集DKK3

5.3.4 DKK3缺陷促进肺癌细胞迁移

5.3.5 Res-hucMSC-Ex递送DKK3抑制肺癌转移

5.3.6 Res-hucMSC-Ex转运DKK3抑制肺癌Wnt/β-catenin信号通路

5.4 讨论

第六章 结论与展望

6.1 主要结论

6.2 研究创新点

6.3 展望

参考文献

致谢

博士期间的科研成果

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著录项

  • 作者

    尹磊;

  • 作者单位

    江苏大学;

  • 授予单位 江苏大学;
  • 学科 临床检验诊断学
  • 授予学位 博士
  • 导师姓名 钱晖;
  • 年度 2020
  • 页码
  • 总页数
  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 R94R39;
  • 关键词

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