目 录
缩略语表
第一章 文献综述
1.1 融合蛋白中人血清白蛋白（HSA）的作用研究
1.1.1 人血清白蛋白(HSA)的结构
1.1.2 人血清白蛋白(HSA)的应用
1.2 融合蛋白中豹蛙抗瘤酶（ONC）的发展现状
1.2.1 豹蛙抗瘤酶（ONC）的结构
1.2.2 豹蛙抗瘤酶（ONC）的作用机理
1.2.3 豹蛙抗瘤酶（ONC）的前景展望
1.3 连接肽的研究现状与应用
1.3.1 连接肽的分类及特点
1.3.2 重组连接肽的功能
1.3.3 重组连接肽的设计原理
1.4 融合蛋白的特点与应用
1.4.1 融合蛋白的特点
1.4.2 融合蛋白的应用
1.5 研究目的、意义和内容
1.5.1 研究目的与意义
1.5.2 研究内容
第二章 实验材料及试剂
2.1 构建融合蛋白HSA-G4SRKDRRG4S-ONC毕赤酵母工程菌的材料与试剂
2.1.1 主要材料
2.1.2 主要试剂
2.2 融合蛋白HSA-G4SRKDRRG4S-ONC的表达与分离纯化的材料与试剂
2.2.1 主要材料
2.2.2 主要试剂
2.3 融合蛋白HSA-G4SRKDRRG4S-ONC对细胞活性的分析及其机理的材料与试剂
2.3.1 主要材料
2.3.2 主要试剂
第三章 构建融合蛋白HSA-G4SRKDRRG4S-ONC毕赤酵母工程菌的实验方法
3.1 试剂配制
（1）主要贮存液
（2）培养基
3.2 实验方法
3.2.1 重组质粒HSA-G4SRKDRRG4S-ONC的构建技术路线
3.2.2 引物设计
3.2.3 目的基因HSA的扩增与回收
3.2.4 目的基因ONC的扩增与回收
3.2.5 融合蛋白基因HSA-G4SRKDRRG4S-ONC的扩增和回收
3.2.6 pMD20-T/HSA-G4SRKDRRG4S-ONC重组（扩增）质粒的构建和鉴定
3.2.7 pPIC9K/HSA-G4SRKDRRG4S-ONC重组（表达）质粒的构建和鉴定
3.2.8 pPIC9K/HSA-G4SRKDRRG4S-ONC毕赤酵母工程菌的构建、筛选与鉴定
第四章 融合蛋白HSA-G4SRKDRRG4S-ONC的表达与分离纯化的实验方法
4.1 试剂配制
4.1.1 主要贮存液配制
4.1.2 培养基配制
4.2 实验方法
4.2.1 重组蛋白HSA-G4SRKDRRG4S-ONC的诱导表达
4.2.2 重组蛋白HSA-G4SRKDRRG4S-ONC的鉴定：SDS-PAGE电泳
4.2.3 融合蛋白HSA-G4SRKDRRG4S-ONC的分离纯化
第五章 融合蛋白HSA-G4SRKDRRG4S-ONC对细胞活性的分析及其机理的实验方法
5.1 试剂配制
5.2 实验方法
5.2.1 大鼠肝癌细胞CBRH-7919的培养
5.2.2 细胞活性检测：MTT显色
5.2.3 流式细胞术(Flow-Cytometry)
5.2.4 蛋白免疫印迹（Western Blot）
第六章 实验结果与分析
6.1 构建融合蛋白HSA-G4SRKDRRG4S-ONC的毕赤酵母工程菌的实验结果与分析
6.1.1 扩增与回收目的基因HSA
6.1.2 扩增与回收目的基因ONC
6.1.3 扩增与回收的融合蛋白基因HSA-G4SRKDRRG4S-ONC
6.1.4 鉴定的pMD20-T∕HSA-G4SRKDRRG4S-ONC重组（扩增）质粒
6.1.5 构建的pPIC9K/HSA-G4SRKDRRG4S-ONC重组（表达）质粒
6.1.6 筛选与鉴定的pPIC9K/HSA-G4SRKDRRG4S-ONC重组（表达）质粒
6.1.7 鉴定的 GS115∕pPIC9K/HSA-G4SRKDRRG4S-ONC毕赤酵母工程菌株
6.2 融合蛋白HSA-G4SRKDRRG4S-ONC的表达与分离纯化的实验结果与分析
6.2.1 重组酵母菌GS115诱导表达融合蛋白HSA-G4SRKDRRG4S-ONC的鉴定
6.2.2 检测分离纯化的融合蛋白HSA-G4SRKDRRG4S-ONC
6.3 融合蛋白HSA-G4SRKDRRG4S-ONC对细胞活性的分析及其机理的实验结果与分析
6.3.1 融合蛋白HSA-G4SRKDRRG4S-ONC对细胞活性的影响
6.3.2 融合蛋白HSA- G4SRKDRRG4S-ONC对细胞凋亡的影响
6.3.3 融合蛋白HSA-G4SRKDRRG4S-ONC对细胞周期的影响
6.3.4 融合蛋白HSA-G4SRKDRRG4S-ONC对细胞凋亡相关蛋白表达的影响
结论
参考文献
致 谢
攻读硕士学位期间取得的成果
声明
河南师范大学;
