缩略语表
第一章 文献综述
1.1 融合蛋白的设计策略及其应用
1.1.1 融合蛋白的特点
1.1.2 融合蛋白的设计策略
1.1.3 融合蛋白的应用
1.2 人血清白蛋白（HSA）的研究现状
1.2.1 人血清白蛋白（HSA）的结构特点
1.2.2 人血清白蛋白（HSA）的理化性质及生理功能
1.2.3 人血清白蛋白（HSA）的临床应用
1.3 豹蛙抗瘤酶（ONC）的作用研究
1.3.1 豹蛙抗瘤酶的结构
1.3.2 豹蛙抗瘤酶（ONC）的作用机理
1.3.3 豹蛙抗瘤酶的前景展望
1.4 研究目的和内容
1.4.1 研究目的
1.4.2 研究内容
第二章 构建融合蛋白HSA-G4SKNNNKG4S-ONC 的材料与方法
2.1 主要材料
2.2 主要试剂及配置
2.3 实验方法
2.3.1 引物设计
2.3.2 重组质粒HSA-G4SKNNNKG4S-ONC 的构建方案
2.3.3 目的基因的扩增与回收
2.3.4 融合蛋白基因HSA-G4SKNNNKG4S-ONC的扩增和回收
2.3.5重组（扩增）HSA-G4SKNNNKG4S-ONC质粒的构建与鉴定
2.3.6重组（表达）pPIC9K/HSA-G4SKNNNKG4S-ONC质粒的构建与鉴定
2.3.7 pPIC9K/HSA-G4SKNNNKG4S-ONC毕赤酵母工程菌的构建与鉴定
第三章 融合蛋白HSA-G4SKNNNKG4S-ONC 的表达与分离纯化
3.1 主要材料
3.2 主要试剂
3.3 重组蛋白HSA-G4SKNNNKG4S-ONC的诱导表达
3.4 SDS-PAGE电泳
3.5 融合蛋白HSA-G4SKNNNKG4S-ONC的分离纯化
第四章 实验结果与分析
4.1 目的基因的扩增与回收结果
（1）确定引物A1、D2 最佳退火温度
（2）用高保真酶Prime STAR HS DNAPolymerase 扩增产物HL1
（3）回收扩增产物HL1
（4）确定引物D3、A4最佳退火温度
（5）回收基因ONC扩增产物L1O
4.2 融合蛋白HSA-G4SKNNNKG4S-ONC的扩增和回收结果
（1）确定最佳模板比例
（2）利用高保真酶Prime STAR HS DNA Polymerase 进行扩增
（3）扩增产物HSA-G4SKNNNKG4S-ONC的回收
4.3 重组（扩增）HSA-G4SKNNNKG4S-ONC质粒的结果
（1）菌液PCR
（2）质粒PCR
（3）目的基因公司测序结果
4.4 重组（表达）质粒pPIC9K/HSA-G4SKNNNKG4S-ONC构建结果
4.5重组（表达）质粒pPIC9K/HSA-G4SKNNNKG4S-ONC筛选与鉴定的结果
（1）菌液PCR
（2）质粒鉴定，BamH I，EcoR I单、双酶切鉴定
4.6 pPIC9K/HSA-G4SKNNNKG4S-ONC毕赤酵母工程菌的构建与鉴定
4.7 融合蛋白HSA-G4SKNNNKG4S-ONC的分离纯化
4.7.1 重组酵母菌GS115诱导表达融合蛋白HSA-G4SKNNNKG4S-ONC
4.7.2 分离纯化融合蛋白HSA-G4SKNNNKG4S-ONC
第五章 融合蛋白HSA-G4SKNNNKG4S-ONC 对细胞活性的分析及其机理
5.1 主要材料
5.2 主要试剂
5.3实验方法
5.3.1大鼠肝癌细胞CBRH-7919的培养
5.3.2 细胞活性检测：MTT显色
5.3.3 AnnexinV-FITC/PI 双染细胞凋亡检测法
5.3.4流式细胞术(Flow-Cytometry)检测细胞周期
5.3.5 蛋白免疫印迹（Western Blot）
5.4 实验结果与分析
5.4.1 融合蛋白HSA-G4SKNNNKG4S-ONC 对细胞活性的影响
5.4.2融合蛋白HSA- G4SKNNNKG4S-ONC 对细胞凋亡的影响
5.4.3融合蛋白HSA-G4SKNNNKG4S-ONC对细胞周期的影响
5.4.4 融合蛋白HSA-G4SKNNNKG4S-ONC对细胞凋亡相关蛋白表达的影响
总结与结论
参考文献
致 谢
攻读硕士学位期间取得的成果
声明
河南师范大学;
