小麦冰重结晶抑制蛋白基因TaIRI5的克隆与功能分析

目录

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致谢

摘要

1文献综述

1．1小麦冻害的研究

1．2抗冻蛋白研究进展

1．3启动子研究进展

1．4基因编辑研究进展

2引言

3材料与方法

3．1实验材料

3．1．1植物材料与处理

3．1．2菌株及载体材料

3．1．3实验所用试剂及耗材

3．1．4实验器材

3．1．5实验所用引物序列

3．1．6实验用培养基及试剂配方

3．2．1 DNA的提取

3．2．2RNA的提取

3．2．3 cDNA第一条链的合成

3．3基因克隆及序列分析

3．3．1目的基因的克隆

3．3．2琼脂糖胶回收

3．3．3 pMD19-T载体连接

3．3．4重组载体的转化

3．3．5重组载体的质粒提取

3．4 TaIRI5基因的表达分析

3．4．3TaIRI5基因的胁迫表达分析

3．5．2目的基因的制备与载体线性化

3．5．3重组载体的构建

3．5．4根癌农杆菌转化

3．5．5农杆菌介导的烟草转化实验

3．6．1启动子序列分析

3．6．2引物设计

3．6．3启动子重组载体的构建

3．6．4启动子重组载体农杆菌转化

3．6．5农杆菌介导的启动子功能研究

3．7 TaIRI5基因过表达载体的构建及遗传转化

3．7．1引物设计

3．7．2目的基因的制备与载体线性化

3．7．3TaIRI5过表达重组载体的构建

3．7．4根癌农杆菌转化

3．7．5农杆菌介导的小麦茎尖转化实验

3．8 TaIRI5基因基因编辑敲除载体的构建及遗传转化

3．8．1基因编辑引物设计

3．8．2 gRNA表达盒的连接

3．8．4 pYLCRISPR/Cas9-TaIRI5重组载体的构建

3．8．5 pYLCRISPR/Cas9-TaIRI5重组载体的验证

3．8．6 pYLCRISPR/Cas9-TaIRI5重组载体的农杆菌转化与小麦茎尖侵染

4结果与分析

4．1．2 TaIRI5基因序列分析

4．1．3 TaIRI5基因同源比对与系统进化树分析

4．2 TaIRI5基因的表达分析

4．2．2 TaIRI5基因的组织特异性表达分析

4．2．3 TaIRI5基因不同胁迫处理下的表达分析

4．3 TaIRI5基因的亚细胞定位分析

4．4 TaIRI5基因的启动子功能分析

4．5 TaIRI5基因过表达分析

4．6 TaIRI5基因基因编辑分析

5讨论

参考文献