鸡肉中恩诺沙星的MISPE-HPCE检测方法的研究

摘要

随着社会的发展，动物源性食品在人们膳食结构中所占的比重越来越大，但其中残留的药物、添加剂等对人体造成的危害也越来越大。中国作为畜禽产品重要出口国，将在相当长的一段时间内必须面对药物残留所形成的贸易技术壁垒。因此多种类、多组分残留的高效样品前处理和检测技术的研究将是残留分析的重点。
　　 分子印迹聚合物具有选择性高、稳定性好及制备简单的特点，可用于复杂基体中痕量分析物的分离与富集，因此在样品前处理中的应用特别引入关注。
　　 本论文首先利用高效毛细管电泳法为检测手段，以结合力和选择性为考察指标，研究了恩诺沙星分子印迹聚合物的制备；建立了含恩诺沙星等在内的8种氟喹喏酮类和磺胺类兽药多组分残留的高效毛细管电泳法检测方法；研究了鸡肉中恩诺沙星的分子印迹固相萃取法，并最终建立了鸡肉组织中恩诺沙星的分子印迹固相萃取-高效毛细管电泳法（MISPE-HPCE）检测方法。
　　 1.恩诺沙星分子印迹聚合物的制备。
　　 以恩诺沙星作为模板分子，α-甲基丙烯酸（MAA）为功能单体，用二氯甲烷溶解，加入交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯（EDMA）和引发剂偶氮二异丁腈（AIBN），合成恩诺沙星分子印迹聚合物。
　　 利用高效毛细管电泳法研究了该分子印迹聚合物的结合力和选择性。结果表明，恩诺沙星印迹聚合物对恩诺沙星具有很强的亲和力，最大表观结合常数分别为Qmax1=8.0385μmol·g-1和Qmax2=4.5357μmol·g-1。恩诺沙星分子印迹聚合物对恩诺沙星的结合具有较高的选择性，研究表明分子印迹聚合物和非分子印迹聚合物对恩诺沙星、氧氟沙星和培氟沙星的结合率分别为78.4％、33.9％、37.3％和30.8％、19.2％、21.5％。
　　 2.含恩诺沙星在内的8种兽药的高效毛细管电泳法检测方法的建立。
　　 建立了8种氟喹喏酮类和磺胺类兽药残留同时分离的高效毛细管电泳方法，通过考察电泳缓冲液类型、离子浓度、pH值、电压、温度对分离的影响，确定初步的电泳条件，以pH值、电压、温度为试验因子，各因子的3个水平做正交试验，以相临两色谱峰的分离度为指标，筛选出最佳的分离条件：缓冲液为磷酸氢二钠（40 mmol/L）-柠檬酸（20 mmol/L），pH8.47，电压为22 kV，温度为20℃，检测波长262 nm。结果表明，8种药物在9 min内完全分离，且各组分浓度与峰面积呈良好的线性关系，r为0.999～0.9995。RSD为0.44％～1.15％（迁移时间）和1.12％～2.32％（峰面积）。该法快速、简便、准确。
　　 3.鸡肌肉组织中恩诺沙星的MISPE-HPCE检测方法的建立。
　　 将合成的恩诺沙星分子印迹聚合物（通常为50～500 mg）装填于空的固相萃取小柱中，制成恩诺沙星分子印迹固相萃取柱。比较了不同洗提剂及其用量对鸡肉组织中恩诺沙星淋洗和洗脱效果，结果表明以正己烷5mL为淋洗剂，6mL甲醇/乙酸（V：V=8：2）为洗脱剂，可以达到较好的提取效果。
　　 比较了分子印迹固相萃取、固相萃取和基质固相分散萃取三种前处理方法对鸡肌肉组织中恩诺沙星的提取回收率。采用高效毛细管电泳法测定鸡肉组织中恩诺沙星的回收率分别为82.37％、70.24％、82.43％。建立了鸡肌肉中恩诺沙星分子印迹固相萃取-高效毛细管电泳联用的检测方法。
　　 本研究表明：建立的鸡肉中恩诺沙星分子印迹固相萃取-毛细管电泳检测法（MISPE-HPCE），选择性高、精密度好，回收率达到了兽药残留分析的要求。建立9min内同时检测8种兽药残留的高效毛细管电泳法方法，该方法简便、快速，对于同时监控8种兽药在动物源性食品中的残留，确保人们的健康，具有重要的理论和实践意义。

目录

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论文说明：本文常用英文缩写词

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文献综述

引言

1材料与方法

1.1实验材料与设备

1.1.1实验动物

1.1.2标准品

1.1.3试剂与材料

1.1.4仪器设备

1.2溶液的配制

1.2.1 HPCE标准贮备溶液

1.2.2 HPCE缓冲溶液的配制

1.2.3样品处理溶液的配制

1.3实验方法

1.3.1恩诺沙星分子印迹聚合物的制备及其性能测试

1.3.2 8种兽药残留HPCE分析分离检测方法的建立

1.3.3恩诺沙星MISPE柱的制备及应用性能评价

1.3.4恩诺沙星MISPE前处理方法的建立

1.3.5恩诺沙星MISPE前处理方法与其它方法的比较

1.3.6恩诺沙星MISPE柱稳定性实验

2结果与分析

2.1分子印迹聚合物的制备

2.1.1恩诺沙星分子印迹聚合物溶剂的确定

2.1.2恩诺沙星分子印迹聚合物的结合特性

2.1.3恩诺沙星MIPs对底物的选择性

2.2 8种兽药残留HPCE分离检测方法的建立

2.2.1检测波长的确定

2.2.2电泳缓冲液种类的选择

2.2.3电泳缓冲液离子浓度的选择

2.2.4电泳缓冲液pH值的选择

2.2.5分离电压和温度的选择

2.2.6正交试验

2.2.7 HPCE方法的评价

2.3鸡肉中恩诺沙星MISPE方法的建立

2.3.1恩诺沙星MISPE柱淋洗剂和洗脱剂种类及淋洗剂用量的选择

2.3.2恩诺沙星MISPE柱洗脱剂用量的选择

2.3.3鸡肉中恩诺沙星MISPE前处理方法评价

2.3.4检测限与定量限

2.3.5不同前处理方法的比较

2.3.6恩诺沙星MISPE柱多次使用稳定性研究

3讨论

结论

参考文献

致 谢

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