白色紫锥菊不定根培养及抗炎特性的研究

摘要

白色紫锥菊是具有极高药用价值和观赏价值的多年生草本植物。国内没有其野生资源，且引种后不同地区人工栽培的白色紫锥菊品质差异较大，难以满足市场需求。因此，以白色紫锥菊不定根作为产品生产的原材料具有十分重要意义。　　为了提高不定根生物量和有效物质积累，本文对白色紫锥菊不定根培养条件进行了优化。研究采用单因素和均匀设计试验对培养基组分进行了筛选。单因素试验结果发现最佳的磷浓度为0.94 mM，氮浓度为45 mM，硝态氮和铵态氮浓度比为37.5 mM/7.5 mM。采用3因素（氮、磷和蔗糖）12水平（浓度）进行均匀试验，发现不定根生物量和有效物质积累最佳的组合为氮浓度45 mM、磷浓度1.56 mM和蔗糖浓度50 g·L-1，总酚和黄酮生产量分别达到297.91 mg·L-1和211.94mg·L-1。进一步利用生物反应器进行了不定根培养动态研究，发现0～10 d为不定根生长的延迟期，10～30 d为指数生长期，30～50 d为平稳期。在培养30d时不定根生长和有效物质积累最多，鲜物重和干物重分别为304.28 g和29.82 g，而总酚和黄酮生产量分别达到398.99mg·L-1和280.57mg·L-1。因此，可确定30 d为白色紫锥菊不定根生物反应器培养的最佳培养周期。　　在体外抗炎试验中，进行了不定根提取物对脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞(PMs)促炎介质释放的影响研究。不同浓度提取物对几种促炎介质的抑制程度有差异，但浓度为100μg·mL-1时，对一氧化氮(NO)、前列腺素E2(PGE2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)的产生以及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧化酶-2（COX-2）蛋白表达均具有显著抑制作用。进一步，本研究探究了不定根提取物对核转录因子(NF)-κB和丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)两种信号通路相关蛋白表达的影响，结果发现不定根提取物(25～100μg·mL-1)对NF-κB信号通路中的NF-κB抑制蛋白(IκB)-α表达无明显影响，但可显著降低MAPKs信号通路中的p38、ERK和JNK蛋白的磷酸化水平，表明白色紫锥菊不定根是通过调控MAPKs信号通路发挥抗炎作用。

目录

声明

摘要

英文缩写词表

前言

1 材料与方法

1．1 试验材料

1．2 试验方法

1．2．1 培养基组分对不定根生长和有效物质积累的影晌

1．2．2 不定根生长和有效物质积累的动态研究

1．2．3 抗炎研究

1．2．4 测定方法

1．3 数据分析

2 结果与分析

2．1 培养基组分对不定根生长和有效物质积累的影晌

2．1．1 培养基中磷浓度影响

2．1．2 培养基中氮浓度影响

2．1．3 培养基中NO3-和NH4+影响

2．1．4 培养基条件优化

2．2 不定根生物反应器培养的研究

2．2．1 不定根生长和有效物质积累的动态研究

2．3 抗炎研究

2．3．1 不定根提取物中有效物质含量

2．3．2 抗炎研究

3 讨论

3．1 培养基组分的研究

3．2 反应器不定根培养研究

3．3 抗炎活性研究

4 结论

参考支献

致谢