环氧合酶在Rhodospirillum rubrum H2中的表达研究

目录

声明

第1章 绪论

1.1 课题研究背景及意义

1.1.1 课题研究背景

1.1.2 蛋白表达系统

1.2环氧合酶

1.2.1 环氧合酶的分类

1.2.2 环氧合酶的基因表达与调节

1.2.3 环氧合酶的功能

1.3 光合细菌

1.3.1 光合细菌的应用

1.3.2 光合细菌捕光系统

1.3.3 Rhodospirillum rubrum光合细菌

1.4 本文研究的目的及研究内容

1.4.1 研究目的

1.4.2 研究内容及路线

1.5 本文创新点

第2章 菌种的恢复和目标基因的获取

2.1 实验材料

2.1.1 实验菌株

2.1.2 实验仪器

2.1.3 实验试剂

2.1.4 培养基及溶液

2.2 实验方法

2.2.1 R.rubrumH2菌种的恢复与鉴定

2.2.2 COX-1、mPGES-1目标基因的扩增与鉴定

2.3 实验结果

2.3.1 菌种的成功恢复

2.3.2 目的基因COX-1/mPGES-1 PCR产物的鉴定结果

2.4 本章小结

第3章 重组质粒pPUCTerm-COX-1/mPGES-1的构建及表达

3.1 实验材料

3.1.1 实验菌株

3.1.2 实验仪器

3.1.3 实验试剂

3.1.4 培养基及溶液

3.2 实验方法

3.2.1 目的基因COX-1、mPGES-1与载体pEASY-T1重组

3.2.2 构建携带重组质粒pEASY-T1-COX-1/mPGES-1的Trans1-T1重组菌

3.2.3 重组质粒pEASY-T1-COX-1/mPGES-1的提取与鉴定

3.2.4 目的基因COX-1/mPGES-1与表达载体pPUCTerm重组及转化

3.2.5 构建携带重组质粒pPUCTerm-COX-1/mPGES-1的E.coli WM3064重组菌

3.2.6 重组质粒pPUCTerm-COX-1/mPGES-1的提取与鉴定

3.2.7 重组质粒pPUCTerm-COX-1/mPGES-1与R.rubrumH2结合转化

3.2.8 重组菌蛋白表达鉴定

3.2.9 重组菌电镜检测

3.3 实验结果

3.3.1 重组质粒pEASY-T1-COX-1/mPGES-1的构建结果

3.3.2 重组质粒pEASY-T1-COX-1/mPGES-1测序结果

3.3.3 重组质粒pPUCTerm-COX-1/mPGES-1构建结果

3.3.4 重组质粒pPUCTerm-COX-1/mPGES-1测序结果

3.3.5 重组菌R.rubrumH2-pPUCTerm-COX-1/mPGES-1 PCR鉴定结果

3.3.6 重组菌蛋白表达鉴定结果

3.3.7 重组菌电镜检测结果

3.4 本章小结

第4章 COX-1的活性鉴定

4.1 实验材料

4.1.1 实验菌株

4.1.2 实验仪器

4.1.3 实验试剂

4.1.4 培养基及溶液

4.2 实验方法

4.2.1 酶促反应样品溶液的制备

4.2.2 HPLC法检测COX-1的活性

4.2.3 LC/MS法检测COX-1的活性

4.2.4 底物浓度对COX-1活性的影响

4.2.5 反应时间对COX-1活性的影响

4.2.6 反应pH对COX-1活性的影响

4.3 实验结果

4.3.1 HPLC法检测标准品结果

4.3.2 HPLC法检测供试品结果

4.3.3 LC/MS法检测标准品结果

4.3.4 LC/MS法检测供试品结果

4.3.5 底物浓度对COX-1活性的影响

4.3.6 反应时间对COX-1活性的影响

4.3.7 反应pH对COX-1活性的影响

4.4 本章小结

结 论

参考文献

附录A 重组载体pEASY-T1-COX-1测序结果

附录B 重组载体pEASY-T1-mPGES-1测序结果

附录C 重组载体pPUCTerm-COX-1测序结果

附录D 重组载体pPUCTerm-mPGES-1测序结果

致 谢