CYP3A4/3A5、ABCB1基因多态性与卡马西平、奥平西平及其主要代谢物血药浓度的相关性研究

摘要

目的:建立高效液相法同时测定人血浆中卡马西平、奥卡西平及其主要代谢物10，11-环氧卡马西平、利卡西平浓度的方法，并研究CYP3A4/3A5、ABCB1基因多态性与卡马西平、10，11-环氧卡马西平、奥卡西平及利卡西平血药浓度的相关性。　　方法:　　1.收集中南大学湘雅医院门诊及住院服用卡马西平及奥卡西平的癫痫患者，登记他们的临床资料并抽取清晨静脉血2ml，按入选、排除标准筛选后入组，分为单药组和合并用药组，单药组患者仅服用卡马西平或奥卡西平，合并用药组患者服用卡马西平（奥卡西平）及其他的抗癫痫药物，两组患者合称总和组。　　2.采用高效液相法测定血浆中卡马西平、10，11-环氧卡马西平，奥卡西平、利卡西平的血药浓度;用苯酚-氯仿法提取全血基因组DNA;多重连接酶法对CYP3A4 rs4646440、rs2242480，CYP3A5rs15524、rs776746, ABCB1 rs1045642、rs2032582、rs10234411、rs11285038个SNPs位点进行基因分型。　　3.采用x2检验计算样本的基因型频率及计数资料之间的差异，t检验、单因素方差分析比较组间计量资料的差异，多元线性回归考察影响剂量、血药浓度（包括原药浓度、代谢物浓度、总浓度）的临床因素，PLINK分析SNPs、单体型与校正后血药浓度的关联。　　结果:　　1.建立了同时测定卡马西平、10，11-环氧卡马西平、奥卡西平及利卡西平血药浓度的高效液相方法。卡马西平、10，11-环氧卡马西平、奥卡西平及利卡西平的色谱峰不受血浆中内源性物质的干扰，在线性范围内线性良好(R2＞0.9994)，回归方程分别是Y=0.0795254X-0.00128006、Y=0.0255575X-0.00102140、Y=0.0519381X-0.00246967、Y=0.0239854X-0.000662765，各待测样品的日内、日间RSD0.50％-16.67％，相对回收率90.7％-103.1％，绝对回收率90.0％-106.8％。　　2.共收集服用卡马西平的癫痫患者88例、服用奥卡西平的癫痫患者69例，经Hardy-Weinberg遗传平衡检验，P值大于0.05，两组样本均具有群体代表性。　　3.卡马西平治疗的单药组中，SNPs、单体型与卡马西平的各校正血药浓度、CBE-EP/CBZ校正比值都不相关。　　合并用药组中，rs776746、rs15524与剂量校正的卡马西平血药浓度、总浓度相关（P=0.004、0.013、0.007、0.012）;rs776746、rs15524与单位体重剂量校正的卡马西平血药浓度、总浓度显著相关(P=0.005、0.009、0.010、0.009);rs1045642、rs10234411、单体型rs2032582-rs10234411 AT型与CBE-EP/CBZ校正比值相关(P=0.042、0.014、0.010)。　　总和组中，rs776746与剂量校正的卡马西平血药浓度、总浓度相关（P=0.025、0.028），rs15524与剂量校正的卡马西平总浓度相关(P=0.039); rs15524-rs776746 GT型与剂量校正的卡马西平血药浓度、总浓度相关(P=0.028、0.036)，rs15524-rs776746 AC型与校正的总浓度相关(P=0.045); rs4646440-rs2242480 GT型与CBE-EP/CBZ校正比值显著相关(P=0.002)。　　4.奥卡西平治疗的单药组中，SNPs、单体型与奥卡西平的各校正后血药浓度都不相关。合并用药组中，单体型rs2032582-rs10234411-rs1045642 GAA与剂量校正的利卡西平血药浓度、总浓度相关（P=0.026、0.029）。总和组中，rs2032582与年龄、剂量校正的奥卡西平血药浓度相关(P=0.016)。　　结论:　　1.本研究建立的同时测定卡马西平、10，11-环氧卡马西平、奥卡西平及利卡西平血药浓度的高效液相方法简单、准确、应用性强，满足临床血药浓度监测的需要。　　2.CYP3A5基因rs776746、rs15524位点的多态性与卡马西平血药浓度有相关性，其他基因多态性与血药浓度没有表现出相关性。

目录

声明

摘要

缩略词表

前言

第一章 HPLC法同时测定癫痫患者卡马西平、奥卡西平及其主要代谢物的血药浓度

1．1 仪器与试剂

1．1．1 仪器

1．1．2 试剂

1．2 实验方法

1．2．1 色谱条件

1．2．2 标准溶液和质控品的配制

1．2．3 样品的处理方法

1．3 实验结果

1．3．1 专属性

1．3．2 标准曲线和线性范围

1．3．3 精密度

1．3．4 回收率

1．3．5 稳定性

1．3．6 室内质控

1．4 讨论

1．4．1 样品处理方法

1．4．2 波长

1．4．3 流动相

1．4．4 内标

1．4．5 稳定性

1．4．6 室内质控

1．4．7 室间质控

1．5 小结

第二章 CYP3A4/3A5、ABCB1基因多态性与卡马西平及主要代谢产物血药浓度的相关性研究

2．1 材料和方法

2．1．1 仪器和试剂

2．1．2 研究方法

2．2 结果

2．2．1 患者的基本资料

2．2．2 患者基因型、等位基因频率分布

2．2．3 SNPs与剂量的相关性

2．2．4 SNPs与卡马西平血药浓度研究指标的相关性

2．2．5 单体型与卡马西平血药浓度研究指标的相关性

2．3 讨论

2．3．1 SNPs与卡马西平血药浓度研究指标的相关性分析

2．3．2 单体型与卡马西平血药浓度研究指标的相关性分析

2．4 小结

第三章 CYP3A4/3A5、ABCB1基因多态性与奥卡西平及主要代谢物血药浓度的相关性研究

3．1 材料和方法

3．1．1 仪器和试剂

3．1．2 研究方法

3．2 结果

3．2．1 患者的基本资料

3．2．2 患者基因型、等位基因频率分布

3．2．3 SNPs与剂量的相关性

3．2．4 SNPs与奥卡西平血药浓度研究指标的相关性

3．2．5 单体型与奥卡西平血药浓度研究指标的相关性

3．3 讨论

3．3．1 SNPs与奥卡西平血药浓度研究指标的相关性分析

3．3．2 单体型与奥卡西平血药浓度研究指标的相关分析

3．4 小结

结论

参考文献

综述 卡马西平抗癫痫作用的基因多态性研究

附录

致谢

攻读学位期间主要研究成果