青藤碱对大鼠EAE的防治作用及IL-10、TGF-β1表达的影响

摘要

目的：青藤碱是从植物青风藤提取的生物碱单体，在类风湿性关节炎的临床治疗中取得了良好疗效且副作用小。近年大量研究显示青藤碱有良好的免疫抑制作用，但青藤碱对人类中枢神经系统(central nervous，CNS)自身免疫性脱髓鞘性疾病多发性硬化(Multiple sclerosis，MS)是否有效尚不清楚。已有研究显示，青藤碱通过抑制脑组织内促炎的核转录因子-kB(nuclear factor KappaB，NF-kB)的活性改善MS的动物模型-实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyel-itis，EAE)大鼠的临床与病理。本研究欲从调节性细胞因子白介素(inter-leukin，IL)-10、转化生长因子(transforming growth factor，TGF)-β1的角度进一步探讨青藤碱对EAE大鼠的防治作用及可能的机制。 方法：用豚鼠脊髓匀浆(guinea pig spinal cord homogenate，GPSCH)、完全福氏佐剂(complete freund's adguvant，CFA)、百日咳疫苗原浆液(pertussis vaccine，PV)致敏雌性Wistar大鼠，建立EAE模型，并用青藤碱、泼尼松干预治疗。50只雌性Wistar大鼠随机分成4组：正常对照组5只，EAE组(GPSCH+CFA+PV)、青藤碱组(EAE+青藤碱100mg/kg·d)和激素组(EAE+泼尼松5mg/kg·d)各15只，除正常对照组外，各组再随机分成三个亚组，每个亚组5只。青藤碱组、激素组大鼠在抗原免疫后第1天开始，分别给予相应药物干预，每天一次，直到处死前一天。正常对照组在免疫后15天全部处死，其余三组的三个亚组分别在抗原免疫后的第11天、第15天、第21天处死。观察各组大鼠发病、体重变化情况并进行神经功能评分。取大鼠脑和脊髓组织切片进行检测：用苏木素-伊红(hematoxylin-eosin，HE)染色后在光镜下进行炎性病灶计数；免疫组化方法和平均光密度测定检测各组大鼠脑和脊髓白质组织内IL-10和TGF-β1的表达情况。采用SPSS13.0软件包进行统计学分析。 结果： 1.各组大鼠EAE发病的临床结果显示：正常对照组无大鼠发病。与EAE组比较，青藤碱组和激素组大鼠EAE发病的潜伏期延长(p＜0.05)，发病率、神经功能评分和体重损失降低(p＜0.05)；青藤碱组和激素组比较，大鼠EAE的潜伏期、发病率、神经功能评分和体重损失无显著性差异(p＞0.05)。 2.各组大鼠CNS的脏染色病理结果显示：EAE组在第11天时CNS已出现炎性病灶，第15天时炎性病灶范围扩大、数目增加，第21天时炎性病灶减少、程度减轻。与EAE组第15天亚组相比，青藤碱组、激素组第15天亚组CNS的炎性病灶数减少(p＜0.05)；青藤碱组第15天亚组和同期激素组比较，CNS的炎性病灶数无显著性差异(p＞0.05)。 3.各组大鼠CNS白质的免疫组化及图像分析结果显示：与正常对照组CNS白质的IL-10、TGF-β1的表达水平比较，EAE组第11天亚组的IL-10、TGF-β1的表达水平无变化(p＞0.05)，EAE组第15、21天亚组及两干预组各亚组的IL-10、TGF-β1表达水平均增加(P＜0.05)。随着病程的延长，和第11天亚组比较，同组第15天亚组的IL-10、TGF-β1的表达水平更高(P<0.05)；和第15天亚组比较，同组第21天亚组的IL-10、TGF-β1的表达水平更高(P＜0.05)。与同期EAE组比较，用青藤碱和激素干预EAE后的青藤碱组、激素组大鼠的IL-10、TGF-β1的表达水平更高(P<0.05)。青藤碱组和同期激素组比较，IL-10、TGF-β1的表达水平无显著性差异(P>0.05)。 结论： 1.青藤碱可降低EAE发病率、延长潜伏期、改善临床症状，减少炎性病灶数，证实青藤碱对EAE大鼠可能具有保护作用。 2.上调CNS内IL-10和TGF-β1的表达可能是青藤碱发挥其保护作用的机制之一。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩写词简表

声明

第一章前言

第二章材料和方法

2.1实验材料和仪器

2.2实验步骤和方法

2.3结果观察和判断标准

2.4统计分析

第三章结果

3.1各组大鼠的临床表现观察

3.2各组大鼠CNS组织HE染色炎性病灶数观察

3.3各组大鼠CNS IL-10的免疫组化结果观察

3.4各组大鼠CNS TGF-β1的免疫组化结果观察

3.5附图

第四章讨论

第五章结论

参考文献

综述细胞因子在EAE中的作用

致谢