香烟烟雾提取物对人内皮细胞ICAM-1和IL-8表达以及与PMN黏附的影响

摘要

目的：探讨香烟烟雾提取物(CSE)对人内皮细胞细胞间黏附分子-1(ICAM-I)和白介素-8(IL-8)表达以及内皮细胞与多形核中性粒细胞(PMN)黏附的影响。 方法：复苏、传代培养人脐静脉内皮细胞株(ECV-304)，获得足够的实验用内皮细胞。按照Yunchao Su的方法并改良：连续抽吸燃着的两支去过滤嘴香烟烟雾，将烟雾溶解在20mlPBS溶剂中，消毒过滤制备成CSE原液，用无血清DMEM培养基稀释后用于实验。将ECV-304种植在预埋了盖玻片的24孔培养板中，等细胞爬片后，收集(0％、2.5％、5％、10％)CSE干预12小时后和用10％CSE干预不同时间点(Oh、3h、6h、9h、12h)后的细胞标本，采用细胞免疫化学染色法检测内皮细胞上ICAM-l的表达，表达结果用目测积分法进行半定量分析。用不同浓度(2.5％、5％、10％)CSE刺激培养的内皮细胞，预定时间点(Oh、1h、3h、6h、9h、12h、24h、48h)后收集细胞培养上清液，酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞培养上清液的IL-8浓度。用Ficoll密度梯度离心法，从正常健康人血中分离多形核中性粒细胞(PMN)；不同浓度(0％、2.5％、5％、10％)CSE干预ECV-304 12小时后以及10％CSE干预不同时间点(Oh、lh、3h、6h、9h、12h)后，加入分离出来的正常人血PMN，孵育(于饱和湿度、37℃、含5％CO<,2>培养箱中)60分钟后，采用细胞记数法来测定(PMN-EC)的黏附率。最后的数据用SPSSl3.0统计软件进行统计分析，数据以；±S表示，多组间均数比较采用One—Way ANOVA分析，两两比较采用LSD-T检验，取α=0.05，以双侧P<0.05为有统计学意义。 结果： 1、ICAM-1的表达：无CSE干预组、2.5％CSE干预组、5％CSE干预组、10％CSE干预组12小时后ICAM-1在EC上的表达量分别为0.3±0.5、6.3±0.4、6.4±0.5、7.9±0.3，与对照组比较，各干预组ICAM-1表达量均增高，且具有统计学差异(P均<0.01)；各干预组之间比较，随着干预浓度的增加，ICAM-1的表达量增高，除了2.5％CSE干预组和5％CSE干预组之间无统计学差异外(P>0.05)，各组之间相比均有统计学差异(P<0.01)；10％CSE干预(0h、3h、6h、9h、12h)后ICAM-1在EC上的表达量分别为0.3±0.5、5.1±0.3、6.5±0.5、7.0±0.7、7.9±0.3，随着干预时间的延长，ICAM-1的表达量增加，各时间组之间相比均有统计学差异(P均<0.05)。 2、IL-8的表达：无CSE干预组、2.5％CSE干预组、5％CSE干预组、10％CSE干预1小时后IL-8的浓度分别是：(13.6±1.1)、(330.9±15.912)、(474.7±12.018)、(535.1±14.358)pg／ml(P<0.01)，内皮细胞表达IL-8的含量随干预浓度增加而增加。10％CSE干预(Oh、1h、3h、6h、9h、12h、24h、48h)的IL-8浓度分别是：(13.5±1.1)、(535.2±14.358)、(631.7±19.668)、(846.5±19.016)、(1006.7 ±12.621)、(1645.1±52.847)、(1993.6±11.104)、(1974.1±15.571)pg／ml。CSE刺激内皮细胞1小时后就有明显增高(P<0.01)，24小时达高峰，48小时仍维持较高浓度，各时间点差异具有统计学意义(P<0.05)。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语

第一章前言

第二章材料与方法

第三章结果

第四章讨论

第五章结论

参考文献

附录

综述白介素-8与慢性阻塞性肺疾病

致谢