HBX通过上调PTEN甲基化调控PI3K/Akt通路抑制HepG2细胞凋亡

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主要英文缩略词索引

第1章 前言

第2章 主要实验材料及仪器设备

2.1 主要实验材料

2.1.1 质粒、细胞株

2.1.2 主要试剂、耗材及来源

2.2主要仪器设备

2.3 主要溶液配制

2.3.1 细胞培养液

2.3.2 PBS液

2.3.3 细胞冻存液

2.3.4 LB液体培养基

2.3.5 菌种保存液配置

2.3.6 1.2%琼脂糖凝胶配置

2.3.7 10%过硫酸胺

2.3.8 10%分离胶

2.3.9 5%浓缩胶

2.3.10 Western Blot 电泳缓冲液

2.3.11 转移液

2.3.12 TBS 缓冲液

2.3.13 TBST 缓冲液

2.3.14 5%封闭液

2.3.15 1%抗体稀释液

第3章 实验方法

3.1实验分组

3.2 细胞培养

3.2.1 细胞复苏

3.2.2 细胞传代

3.2.3 细胞冻存

3.2.4 接种细胞

3.3 质粒扩增及提取

3.3.1 菌体扩增（摇菌）

3.3.2 菌液冻存

3.3.3 质粒提取

3.3.4 OD 值测定

3.4 瞬时转染

3.5 普通PCR（RT-PCR）

3.5.1 总RNA的提取方法及步骤

3.5.2 逆转录成cDNA

3.5.3 引物设计与合成

3.5.4 PCR扩增

3.5.5 制备琼脂糖凝胶并检测PCR产物

3.6 甲基化特异性PCR（MSP）

3.6.1 细胞DNA 提取（根据公司提供说明书进行）

3.6.2 DNA甲基化修饰及纯化

3.6.3 PTEN基因甲基化与非甲基化引物设计与合成

3.6.4 PCR反应

3.6.5 琼脂糖凝胶电泳(步骤同前)。

3.7 Western Blot

3.7.1 贴壁细胞蛋白提取

3.7.2 BCA试剂盒测定蛋白含量

3.7.3电泳

3.7.4 转膜

3.7.5 封闭

3.7.6 抗体孵育及显影

3.8 流式细胞仪检测细胞凋亡

3.9 统计学方法

第4章 实验结果

4.1 过表达HBVgp3（HBX）基因重组质粒的构建

4.2 测序结果

4.3 瞬时转染后计算转染效率

4.4 流式细胞仪检测各组HepG2细胞凋亡水平

4.5 RT-PCR检测各组HepG2细胞中PTEN mRNA的表达水平

4.6 Western Blot检测各组HepG2细胞中 PTEN蛋白的表达水平

4.7 MSP检测各组HepG2细胞中PTEN基因甲基化及非甲基化的表达水平

4.8 Western Blot检测各组HepG2细胞中 DNMT3A蛋白的表达水平

4.9 Western Blot检测各组HepG2细胞中 p-Akt/Akt蛋白的相对表达水平

第5章 讨论

第6章 结论

参考文献

综述:肝细胞癌表观遗传学的临床意义与应用

致 谢