白脊藤壶cp19k蛋白的界面附着机理及仿生多肽研究

目录

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第一章 绪论

1.1 藤壶

1.1.1 藤壶的进化地位

1.1.2 藤壶的生活周期

1.1.3 藤壶生活周期中的多个粘附事件

1.2 藤壶胶

1.2.1 藤壶胶的体内合成、储存与分泌

1.2.2 藤壶粘着界面的形貌与化学特征

1.2.3 藤壶胶蛋白的分离与表征

1.3 藤壶胶固化机理

1.3.1 藤壶胶蛋白在粘着点的空间定位

1.3.2 表面粘附：配位和物理相互作用

1.3.3 内在粘合：自组装与酶催化交联

1.3.4 界面蛋白与内在蛋白互作

1.3.5 藤壶胶水下粘附分子模型

1.4 本文选题依据及研究内容

第二章 基于融合蛋白Trx-Balcp19k的超强胶粘剂的研究

2.1 Balcp19k的基因克隆与异源表达

2.1.1 Balcp19k的克隆与表达载体的构建

2.1.2 重组蛋白的表达与纯化

2.2Trx-Balcp19k gel超强胶粘剂的发现

2.3 Trx-Balcp19k gel的粘性表征

2.3.1 表面涂层分析

2.3.2快速检测Trx-Balcp19k gel的宏观粘结能力

2.3.3 宏观剪切测试

2.4Trx-Balcp19k gel的生化组成分析

2.4.1 SDS-PAGE检测Trx-Balcp19k gel的蛋白组分

2.4.2比色法检测Trx-Balcp19k gel的总糖和总脂含量

2.5 Trx-Balcp19k gel的形成机理分析

2.6Trx-Balcp19k gel的细胞毒性测试

2.7 本章小结

第三章 无标签重组Balcp19k及其Cys缺失突变体的制备

3.1 新融合蛋白Trx-Balcp19k′的表达与纯化

3.1.1 新重组质粒的构建

3.1.2 Trx-Balcp19k′的诱导表达

3.1.3 结合亲和层析和离子交换层析纯化Trx-Balcp19k′

3.2 肠激酶切割反应

3.2.1 Trx-Balcp19k′的肠激酶切割反应初试

3.2.2 肠激酶切割反应条件的优化

3.2.3 利用优化后的条件切割Trx-Balcp19k′

3.3 无标签rBalcp19k的分离纯化

3.3.1 结合亲和层析与离子交换层析分离rBalcp19k

3.3.2 结合离子交换层析与RP-HPLC分离rBalcp19k

3.3.3 验证纯化的rBalcp19k

3.4 rBalcp19k的Cys缺失突变体的制备

3.4.1 PCR定点突变

3.4.2 rBalcp19k突变体的表达与纯化

3.5 本章小结

第四章 重组Balcp19k的结构、自组装与粘附功能研究

4.1 rBalcp19k的二级结构研究

4.1.1 生物信息学预测rBalcp19k的二级结构

4.1.2 CD检测rBalcp19k的二级结构

4.1.3 检测Trx标签对Balcp19k二级结构的影响

4.2 AFM成像研究rBalcp19k的自组装

4.2.1 rBalcp19k在不同pH下的自组装研究

4.2.2 rBalcp19k在酸性pH下的自组装进程

4.2.3 检测预组装rBalcp19k纳米纤维在海水条件下的稳定性

4.3 rBalcp19k纳米纤维的ThT染色

4.4 rBalcp19k在云母上的附着功能研究

4.4.1 基于AFM的胶体探针技术简介

4.4.2 胶体探针的制备

4.4.3 检测组装前rBalcp19k在云母上的粘性

4.4.4 检测组装后rBalcp19k纳米纤维的粘性

4.5 检测二硫键对Balcp19k的结构、自组装和粘性的影响

4.5.1 CD检测rBalcp19k（C5-39S）的二级结构

4.5.2 rBalcp19k（C5-39S）的自组装研究

4.5.3 rBalcp19k（C5-39S）的粘性

4.6 本章小结

第五章 藤壶cp19k仿生多肽的研究

5.1 Balcp19k仿生多肽的设计与合成

5.2 生物信息学分析Balcp19k仿生多肽的基本性质

5.3 仿生多肽在酸性条件下的结构和自组装研究

5.3.1 多肽样品的制备

5.3.2 CD分析P1~P9在酸性条件下的二级结构

5.3.3 AFM成像检测P1~P9在酸性条件下的自组装形貌

5.3.4 ThT染色

5.4 仿生多肽在PBS中的结构和自组装研究

5.4.1 多肽样品制备

5.4.2 CD分析P1~P9在PBS中的二级结构

5.4.3 AFM成像检测P1~P9在PBS中的自组装形貌

5.4.4 ThT染色

5.5 不同条件下P4的自组装性质研究

5.5.1 浓度对P4自组装的影响

5.5.2 离子强度对P4自组装的影响

5.5.3 pH对P4自组装的影响

5.6 探讨P4自组装的分子机理

5.6.1 预测P4多肽的二级结构

5.6.2 预测P4多肽的三维构象

5.6.3 假想的P4自组装分子机理

5.7 本章小结

第六章 结论

致谢

参考文献

作者在学期间取得的学术成果

附录A 常用英文缩写检索表

附录B 主要仪器设备信息