枝霉MD2的转录组测序及两个紫杉醇合成相关候选基因的过表达分析

目录

声明

第一章绪论

1.1药用植物内生菌

1.1.2 药用植物内生菌的研究进展

1.1.3 典型药用植物的内生菌

1.2产紫杉醇内生菌

1.2.1 分离自红豆杉的产紫杉醇内生菌

1.2.2 分离自非红豆杉植物的产紫杉醇内生菌

1.2.3 紫杉醇的生物合成途径

1.3紫杉醇合成途径中的酰基转移酶

1.3.3 10β-去乙酰巴卡亭Ⅲ乙酰基转移酶

1. 4 本研究的内容、目的与意义

第二章枝霉 MD2 的转录组分析

2.1 引言

2.2 材料与主要仪器

2.2.1 实验材料与试剂

2.2.2 实验仪器

2.3 方法

2.3.1 总 RNA 的提取

2.3.2 cDNA 文库的构建和测序

2.3.3 转录组的 de-novo 组装分析

2.3 .4转录组基因的功能注释

2.3.5 潜在的真菌紫杉醇生物合成途径分析

2 .4结果与分析

2 .4 .2 转录组unigenes的功能注释

2.4.4 Unigenes 的 KEGG通路分析

2 .4 .5 枝霉 MD2 中紫杉醇生物合成途径的预测

2.5 本章小结

第三章 候选基因的生物信息分析及其转基因菌株的构建

3.1 引言

3.2 材料与主要仪器

3.2.1 实验材料与试剂

3.2.2 实验仪器

3.3 方法

3.3.1 候选基因A05868 和A02976的克隆和生物信息分析

3.3.2 候选基因超表达载体的构建

3.3.3 转基因菌株的构建

3.4.1 候选基因的生物信息学分析

3 .4 .2 过表达载体的构建及转基因菌株的筛选

3 .4 .3 转基因菌株的抗性基因检测

3.5 本章小结

第四章 A05868 超表达转基因菌株的验证与分析

4.1 引言

4.2 材料与主要仪器

4.2.1 实验材料与试剂

4.2.2 实验仪器

4.3 方法

4.3.2 A05868/MD2 转基因菌株的 qRT-PCR 分析

4.3.3 A05868/MD2 转基因菌株的紫杉烷类的提取和 HPLC 检测

4 .4结果与分析

4.4.2 A05868/MD2 转基因菌株的目标基因的表达分析

4.4.3 A05868/MD2 转基因菌株的紫杉烷类检测

4.5 本章小结

第五章 A02976超表达转基因菌株的验证与分析

5.1 引言

5.2 材料与主要仪器

5.2.1 实验材料与试剂

5.2.2 实验仪器

5.3 方法

5.3.2 A02976/MD2 转基因菌株的目标基因的表达分析

5.4.1 A02976/MD2 转基因菌株的目标基因的拷贝数分析

5.4.2A02976/MD2 转基因菌株的目标基因表达分析

5.4.3 A02976/MD2 转基因菌株的紫杉烷类检测

5.5 本章小结

第六章总结与展望

6.1 总结

6.2 本研究的创新点

6.3 展望

参考文献

攻读硕士期间发表学术论文及专利申请

致谢