山羊精液保存技术研究

摘要

山羊精液保存技术可提高优秀种公羊的利用效率，加快品种改良步伐，便于精液长途运输，降低疾病传播风险。但目前山羊精液低温保存和冷冻保存技术都还不成熟，需要进一步研究完善。本研究以安徽白山羊为对象，系统研究了不同因素对山羊精液低温及冷冻保存效果，内容如下：
　　1、pH对山羊精液低温保存的影响。采集的混精均分成5份，分别用pH为6.15、6.25、6.35、6.45以及6.80的稀释液稀释，5℃冰箱保存，每两天检测精液品质。结果：保存2d后，pH6.35组的精子活力显著高于其他组（P<0.05）；在保存的第2、6、8、10、12d，pH6.35组的质膜完整率及顶体完整率显著高于其他组（P<0.05)；用pH6.35的稀释液进行低温保存精液，在保存4、10、12d时检测前提升缓冲液pH至7.2，活力均显著高于未提升组（P<0.05）。
　　2、缓冲液渗透压对山羊精液低温保存的影响。采集的混精均分成4份，分别使用渗透压为330mOsm、350mOsm、375mOsm、400mOsm的稀释液进行稀释，5℃冰箱保存，每两天检测精液质量。结果：保存8d后，渗透压为375mOsm组的活力显著高于其他各组（P<0.05)、保存6天后375mOsm组的质膜完整率、顶体完整率显著高于其他各组（P<0.05)。
　　3、使用上述优化了的低温保存方法低温保存后进行人工授精，用鲜精、保存3d、6d、9d的精液输精，结果低温保存3d、6d的不返情率大于70％，达到了输精的要求，低温保存9d的不返情率虽然显著低于第3d（P<0.05)，但也达到63.11%。
　　4、通过一系列试验，优化了山羊冻精保存方案：公羊年龄4～6岁；基础稀释液组分为Tris3.07g/100mL、果糖1.26g/100mL、柠檬酸1.64g/100mL、卵黄浓度为15%；两步稀释，稀释后精子密度为2.4×108个/mL；降温平衡时间4h；甘油浓度为5%，添加甘油后再平衡时间为30min；距离液氮面上方预冷高度4cm，预冷10min；37℃水浴解冻30s。
　　5、胆固醇（cholestero，CHL）替代卵黄（eggyork，EY）对山羊冻精质量的影响。采集精液混合后均分成5等份，分别用添加1.0 g/L（C1组）、2.5 g/L（C2.5组）、5.0 g/L（C5组）、10.0g/L（C10组）的CHL或15%的EY（对照组）的基础冷冻缓冲液稀释冷冻。解冻后的精子运动学参数使用精子分析仪（SCAS）检测，质膜完整率通过低渗肿胀试验（hypoosmoticswelling test，HOST）检测，顶体完整率通过姬姆萨染色来检测。结果显示：对照组的冻-融精子活力、顶体完整率、曲线速率（curvvilinear velocity，VCL）、平均路径速度（velocity of average path，VAP）显著高于各CHL添加组（P<0.05），质膜完整率、线性度（linearity，LIN）、前向性（straightness，STR）、摆动性（wobble，WOB）、精完整率显著高于C1组（P<0.05）。
　　6、磷脂酰胆碱（phosphatidylcholine，PC）替代EY对山羊冻精质量的影响。采集精液混合后均分成5等份，分别用添加10 g/L（P10）、15 g/L（P15）、20 g/L（P20）、25g/L（P25）的PC或15% EY（对照组）的基础冷冻缓冲液稀释冷冻。结果：P15组冻-融精子的活力及VCL、VAP、LIN、STR、WOB及BCF等运动参数与EY组差异不显著（P>0.05）；P10、P20及P25组解冻精子活力均显著低于EY组（P<0.05）。
　　7、精子冻-融子头部侧摆幅度（amplitude of lateral head displacement，ALH）及鞭打频率（beat-cross frequency，BCF）与C2.5、C5和C10组无显著差异（P>0.05），但质膜前后膜上胆固醇和磷脂含量变化。检测发现山羊鲜精中精子膜磷脂含量为559.5±20.23 nmol/109，胆固醇含量为320.0±16.7 nmol/109；采用基础稀释液（不添加卵黄或脂质）稀释精液，冻-融后，精子磷脂含量为420.3±18.1 nmol/109，胆固醇含量为130.7±20.8 nmol/109；冻-融后精子磷脂、胆固醇丢失质量比约为3.759﹕1。
　　8、PC-CHL联合替代EY对山羊冻精质量的影响。根据前一个试验研究的结果设计了以下PC-CHL联合替代配方：基础液＋19g/LPC＋1g/L CHL（P19＋C1）；基础液＋18g/L PC＋2g/L CHL（P18＋C2）；基础液＋16g/L PC＋4g/L CHL（P16＋C4）；基础液＋14g/LPC＋6g/L CHL（P14＋C6），对照组为基础液＋15% EY。
　　结果：冻-融处理后，P19＋C1、P18＋C2组的精子活力、VCL、直线运动速度（velocity of straight-line，VSL）、VAP均与对照组无显著差异（P>0.05）；P16＋C4组的精子活力、VCL、VAP均显著高于对照组（P<0.05）；P14＋C6组的精子活力显著低于对照组（P<0.05）；P16＋C4组精子冻-融后磷脂含量显著高于其他各组（P<0.05），胆固醇含量低于EY组，但差异不显著（P>0.05）。
　　9、将上一试验中P16＋C4组和 EY组的颗粒冻精用于山羊人工授精，P16＋C4组的不返情率、受胎率、产羔率均高于 EY组（P>0.05），但公、母比例低于EY组（P>0.05）。
　　结论：
　　1.用于山羊精液5℃低温保存时，缓冲液最佳酸碱度为pH6.35，最佳渗透压为375mOsm；配种前提高精液pH至7.2，可提高精子活力。
　　2.同时添加14g/L的PC和6g/L的CHL可替代15%卵黄用于山羊的精液冻存。

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目录

文献综述

1 山羊精子低温保存技术

2 山羊精子冷冻保存技术

3 存在的问题及发展趋势

第一章 山羊精液低温保存技术研究

引言

1 试验材料

2 试验方法

3.结果与分析

4 讨论

5 小结

第二章 山羊精液冷冻技术研究

引言

1 材料方法

2 结果与分析

3 讨论

4 小结

第三章 脂质替代卵黄对山羊冻精的影响

引言

1. 材料与方法

2.结果与分析

3 讨论

4 小结

全文结论

参考文献

附录：

致谢

个人简历