我国口岸常见蚊类rDNA-ITS和COI基因数据库建立与分析

摘要

[目的]：建立我国口岸常见蚊虫rDNA-ITS、COI基因数据库，以此实现蚊虫的分子鉴定，并基于各地区尖音库蚊复合组的COI基因建立溯源的分子基础。
　　[方法]：于2012年采集我国口岸常见蚊虫（淡色库蚊、致倦库蚊、三带喙库蚊、白纹伊蚊、中华按蚊、骚扰阿蚊），通过核酸提取、基因扩增、质粒载体构建和克隆测序、序列比对、构建系统发育树及多重PCR和凝胶电泳鉴定各蚊种;并分别对江苏各地区尖音库蚊mtDNA-COI基因进行测序，序列比对和系统发育树的构建，建立COI基因数据库。
　　[结果]：淡色库蚊、致倦库蚊、三带喙库蚊、白纹伊蚊、骚扰阿蚊可克隆获得差异的rDNA-ITS，其中野外淡色库蚊及实验室饲养的均为1273bp，三带喙库蚊的克隆片度大小为995bp，致倦库蚊为1314bp，白纹伊蚊为1197bp，骚扰阿蚊为1013bp，而中华按蚊未扩增出全长rDNA-ITS，仅扩增获到rDNA-ITS2片段;通过多重PCR产物凝胶电泳，可获得各蚊种的特异性电泳条带;并获得了连云港、常熟、张家港、盐城、泰州、徐州、南京、南通、无锡9个地区尖音库蚊mtDNA-COI基因型。
　　[结论]：通过对蚊虫rDNA-ITS的多重PCR可实现淡色库蚊、致倦库蚊、三带喙库蚊、白纹伊蚊、中华按蚊、骚扰阿蚊的种属鉴定;江苏地区间的尖音库蚊复合组COI基因序列存在差异，可通过该数据库的核酸信息追溯江苏地区蚊虫的来源。

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摘要

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引言

1 材料与方法

1．1 实验材料

1．1．1 实验蚊虫

1．1．2 主要试剂

1．1．3 主要溶液及缓冲液的配制

1．1．4 主要仪器

1．2 实验方法

1．2．1 蚊虫核基因组rDNA-ITS克隆测序

1．2．2 多重PCR扩增蚊虫rDNA-ITS基因

1．2．3 mtDNA-COI基因扩增与测序

1．2．4 序列分析

2 结果与分析

2．1 蚊虫核基因组rDNA-ITS克隆与测序

2．1．1 各阶段蚊虫rDNA-ITS的PCR产物电泳

2．1．2 各种蚊虫rDNA-ITS的PCR产物电泳

2．1．3 纯化与连接

2．1．4 PCR验证

2．1．5 三带喙库蚊rDNA-ITS克隆测序结果

2．1．6 白纹伊蚊rDNA-ITS克隆测序结果

2．1．7 致倦库蚊rDNA-ITS克隆测序结果

2．1．8 淡色库蚊(野外)rDNA-ITS克隆测序结果

2．1．9 淡色库蚊(实验室)rDNA-ITS克隆测序结果

2．1．10 骚扰库蚊rDNA-ITS克隆测序结果

2．2 多重PCR扩增蚊虫rDNA-ITS基因的结果

2．2．1 各种常见蚊虫rDNA-ITS的多重PCR与PCR产物电泳

2．3 江苏各地区尖音库蚊复合组mtDNA-COI基因数据库

2．3．1 江苏地区尖音库蚊复合组mtDNA-COI基因PCR产物

2．3．2 连云港尖音库蚊复合组mtDNA-COI基因序列

2．3．3 常熟尖音库蚊复合组mtDNA-COI基因序列

2．3．4 张家港尖音库蚊复合组mtDNA-COI基因序列

2．3．5 盐城尖音库蚊复合组mtDNA-COI基因序列

2．3．6 泰州尖音库蚊复合组mtDNA-COI基因序列

2．3．7 徐州尖音库蚊复合组mtDNA-COI基因序列

2．3．8 南京尖音库蚊复合组mtDNA-COI基因序列

2．3．9 南通尖音库蚊复合组mtDNA-COI基因序列

2．3．10 无锡尖音库蚊复合组mtDNA-COI基因序列

2．4 基于蚊虫基因构建进化树

2．4．1 基于5种蚊虫rDNA-ITS序列构建的进化树

2．4．2 基于尖音库蚊复合组mtDNA-COI基因序列构建进化树

3 讨论

3．1 多重PCR扩增rDNA-ITS基因与蚊虫鉴定

3．2 多重PCR扩增rDNA-ITS基因与尖音库蚊复合组成员

3．3 尖音库蚊复合组成员的溯源分析

结论

参考文献

附录A 双脱氧终止法测序结果

后记及致谢

作者简介及读研期间主要科研成果