江苏省不同口岸白纹伊蚊遗传特征分析

摘要

目的: 通过对不同基因型的分子标记技术进行比较，选出最适合对白纹伊蚊进行鉴定和遗传分析的分子标记技术。并对江苏省十个口岸的白纹伊蚊进行溯源性分析，揭示白纹伊蚊的分布与地理距离和港口地域的相关性及其遗传特征。
　　方法: 提取江苏省十个口岸白纹伊蚊的DNA，将提取的线粒体DNA通过PCR对CoI基因进行扩增测序，测序结果在MEGA上通过ClustalW Multiple alignment模块将碱基对齐并构建邻近法进化树;将核糖体DNA的ITS基因连接到质粒载体中，经克隆后进行测序，通过测序结果构建进化树并进行Mantel检验;对基因组核DNA用AFLP技术进行分析:通过高频/低频剪切酶(EcoRI/MseI)对核DNA进行酶切和连接，通过优化过的十对选择性引物进行再次扩增后，经毛细管电泳构建“0”“1”矩阵，通过NTSYS软件计算遗传相似性系数和进行Mantel检验，并构建UPGMA进化树。通过rDNA的ITS基因和核DNA的AFLP分析对江苏省不同口岸的白纹伊蚊进行同源性分析。
　　结果: 通过三种方法对江苏省十个口岸的白纹伊蚊进行鉴定和同源性分析:1.通过对mtDNA-COI基因进行扩增可以很好的对白纹伊蚊进行鉴定，但同源性较高，碱基差异较少，通过进化树分析遗传差异较小，对不同地区的白纹伊蚊不能被很好的区分;2.核糖体DNA的ITS基因通过克隆测序后构建的进化树表明江苏省不同口岸的白纹伊蚊基因序列分为两支，其中，连云港的白纹伊蚊与其他地区的差异较大，单独聚成一支;在另一支中，无锡的白纹伊蚊单独为一支，常州、泰州、徐州和扬州进一步分化成一个小分支，而常州和泰州的白纹伊蚊在此基础上进一步分化为一个较远的小分支;3.对核DNA进行AFLP分析，通过毛细管电泳筛选出了最适合进行白纹伊蚊AFLP分析的十对引物组合，共扩增396条清晰可辨的基因片段，其中包括共有的位点31个，有差异的位点365个，多态性百分率为92.2％，多态性位点丰富，能很好的对白纹伊蚊的遗传差异进行区分。对江苏省十个口岸的白纹伊蚊通过AFLP分析和ITS基因检测的Mantel检验结果表明，白纹伊蚊的遗传距离与地理距离不呈线性相关。而UPGMA进化树在相似性系数0.66处可以将江苏省十个口岸的白纹伊蚊分为三支，常州、淮安、南京、南通、苏州、泰州、徐州、扬州八个地区的白纹伊蚊为一支，无锡和连云港各自分为一支。
　　结论: 实验表明rDNA-ITS基因的扩增和核DNA的AFLP分析均能对白纹伊蚊进行同源性分析，但AFLP分析是对全基因组进行分析，能更好的反映出白纹伊蚊的遗传差异。并揭示了不同口岸的白纹伊蚊的遗传距离与地理距离没有相关性，而与港口的地域性密切相关，为进一步的研究奠定了基础。

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摘要

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引言

第一部分 通过三种不同的分子生物学技术对江苏不同口岸白纹伊蚊进行遗传特征分析

1．1 前言

1．2 实验材料

1．2．1 蚊虫标本的采集

1．2．2 主要仪器

1．2．3 主要试剂

1．2．4 主要溶液的配置

1．3 实验方法

1．3．1 mtDNA-COI基因扩增与溯源分析

1．3．2 蚊虫rDNA-ITS基因分析

1．3．3 核DNA的AFLP分析

1．4 实验结果

1．4．1 mtDNA-COI基因扩增与溯源分析

1．4．2 蚊虫rDNA-ITS基因测序与溯源分析

1．4．3 AFLP分析

1．5 讨论

第二部分 白纹伊蚊体内共生菌沃尔巴克氏体的研究

2．1 前言

2．2 实验材料

2．2．1 蚊虫标本的采集

2．2．2 主要仪器

2．2．3 主要试剂

2．2．4 主要溶液

2．3 实验方法

2．3．1 不同口岸白纹伊蚊mtDNA-COI基因扩增

2．3．2 不同口岸白纹伊蚊体内Wolbachia的wsp基因扩增

2．3．4 Wolbachia的测序和遗传分析

2．4 实验结果

2．4．1 mtDNA-COI基因扩增与溯源分析

2．4．2 白纹伊蚊Wolbachia的wsp基因检测

2．4．3 检出的白纹伊蚊Wolbachia wsp序列测定和溯源性分析

2．5 讨论

结论

参考文献

附录

致谢

作者简介及读研期间主要科研成果