紫红链霉菌2917分泌型磷脂酶A2的原核表达、复性及酶学特性研究

目录

声明

第1章 引 言

1.1 磷脂酶A2

1.1.1 磷脂酶A2

1.1.2 磷脂酶A2的来源

1.1.3 磷脂酶A2的分类以及结构特点

1.1.4 sPLA2的结构特点

1.1.5 sPLA2的催化机理

1.1.6 sPLA2生理功能及其调节机制

1.1.7 sPLA2的应用

1.2 包涵体复性

1.2.1 包涵体形成的原因

1.2.2包涵体表达的优势

1.2.3包涵体复性原理

1.2.4 包涵体提取与洗涤

1.2.5 包涵体的溶解以及复性

1.3研究的目的与意义

第二章 紫红链霉菌2917磷脂酶A2重组载体的构建及其原核表达

2.1 实验材料

2.1.1 菌种和载体

2.1.2 酶与分子量标准

2.1.3 主要试剂

2.1.4 培养基以及溶液

2.1.5主要仪器

2.2 实验方法

2.2.1 sPLA2的密码子的优化

2.2.2 重组载体pET-30c-sPLA2的构建

2.2.3 重组质粒的筛选

2.2.4 重组sPLA2蛋白诱导表达

2.2.5 表达条件的优化

2.2.6 重组蛋白的可溶性分析

2.3 结果与讨论

2.3.1 sPLA2原基因的分析

2.3.2 重组载体pET-30c-sPLA2的构建

2.3.3 重组sPLA2蛋白诱导表达

2.4 本章小结

第三章 重组磷脂酶A2包涵体的初步复性

3.1 实验材料

3.1.1 菌种和主要试剂

3.1.2 主要的培养基以及溶液

3.1.3 主要仪器

3.2 实验方法

3.2.1 包涵体的提取

3.2.2 包涵体的洗涤

3.2.3 包涵体的初步复性

3.2.4 酶活性的测定

3.2.5 蛋白浓度的测定

3.2.6 目标蛋白含量测定

3.3 结果与讨论

3.3.1 包涵体的提取以及洗涤

3.3.2 包涵体初步复性

3.3.3 重组PLA2酶活测定

3.3.4 重组PLA2蛋白含量的测定

3.4 本章小结

第四章复性条件的优化以及复性后的重组磷脂酶A2酶学特性研究

4.1 实验材料

4.1.1 材料和试剂

4.1.2 溶液配制

4.1.3 主要设备

4.2 实验方法

4.2.1 复性条件的优化

4.2.2 重组磷脂酶A2酶学特性的研究

4.3 结果与讨论

4.3.1 复性条件的优化

4.3.2 重组磷脂酶A2酶学特性的研究

4.4 本章小结

第五章 研究总结

5.1 研究结论

5.2 创新之处

5.3 研究展望

参考文献

致谢

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