黄芩素对IL-1β诱导的骨关节炎软骨细胞NF-κB信号通路的影响

摘要

临床上对于骨关节炎（Osteoarthritis，简称OA）患畜的治疗方法主要侧重于缓解症状。如临床上多向患畜的关节腔内注射透明质酸等药物;或使患畜服用解热镇痛药“扑热息痛”、非甾体类抗炎药“NSAIDs”或“COX-2抑制剂”等药物。这些方法虽然可以对OA的临床症状起到缓解作用，但它们对患畜的机体均具有不同程度的副作用。OA的治疗目的不应仅仅是改善症状，而还应达到消除和预防OA的目的。因此，有必要在治疗研究的基础上，应进一步阐明其发病机制及药物作用机理。近年来，许多实验验证的黄芩素(简称BAI)具有多种生物学活性，如抗炎、抗细胞凋亡等。本实验利用IL-1β刺激大鼠软骨细胞，诱导其产生OA模型，将BAI提取液==作用于该模型的软骨细胞中，以探究在IL-1β诱导的大鼠OA中，BAI的干预对NF-κB信号通路及其基因产物表达的影响，为今后OA的临床治疗中BAI可作为快速有效的药物而提供可靠的理论依据。　　实验对SD孕鼠产下的哺乳期幼鼠的软骨细胞进行分离培养，取2代细胞，首先用IL-1β(10ng/ml)进行预处理，24h后将IL-1β（10ng/ml）与（50μM）BAI共同作用于软骨细胞中，分别处理0h、4h、8h、12h和24h。而后利用CCK-8试剂盒对于这些时间点的软骨细胞进行检测，探究BAI是否对软骨细胞的活力产生影响;再利用蛋白免疫印迹法检测软骨细胞中基质金属蛋白酶MMP-3、MMP-9，和化学因子COX-2的表达水平;及BAI对细胞质和细胞核内NF-κB p65和phospho-NF-κBp65表达水平的影响。应用免疫荧光法检测BAI对软骨细胞NF-κB通路中p65核转位的影响。　　实验结果表明不同浓度的BAI干预并没有对软骨细胞造成损伤。BAI能够抑制由IL-1β诱导的OA软骨细胞中MMP-3、MMP-9的表达，并调控了软骨细胞中COX-2的表达下调;抑制细胞质中p65的磷酸化及核转位。　　综上所述，本实验通过对IL-1β诱导的OA软骨细胞的研究，证实了BAI可以抑制OA软骨细胞的凋亡，阻断软骨基质的降解。BAI通过遏制p65的磷酸化及核转位而阻断NF-κB信号通路的激活，从而实现其对软骨细胞的保护机制。为今后临床上应用BAI治疗OA提供了理论依据。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1．1 骨关节炎的临床症状

1．1．2 骨关节炎的病理变化

1．1．3 骨关节炎的发病原因

1．1．4 骨关节炎的发病机制

1．1．5 骨关节炎的治疗现状

1．2 软骨细胞凋亡与骨关节炎

1．2．1 软骨细胞凋亡

1．2．2 介导软骨细胞凋亡的因子

1．2．3 软骨细胞凋亡的信号通路

1．3 黄芩素的研究进展

1．3．1 黄芩素的药用价值

1．3．2 黄芩素与骨关节炎

1．4 实验目的意义

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．1．1 实验动物

2．1．2 实验仪器与设备

2．1．3 实验试剂与药品

2．1．4 主要试剂的配置方法

2．2 实验方法

2．2．1 软骨细胞分离与培养

2．2．2 软骨细胞鉴定

2．2．3 黄芩素的制备

2．2．4 黄芩素对软骨细胞活力影响的检测

2．2．5 实验设计与分组

2．2．7 蛋白提取及Western Blot

2．2．8 数据分析统计

3 实验结果

3．1 软骨细胞形态与鉴定

3．1．1 软骨细胞形态

3．1．2 软骨细胞鉴定

3．2 黄芩素对软骨细胞活力的影响

3．3 黄芩素对软骨细胞内MMP-3、MMP-9、COX-2表达的影响

3．3．2 黄芩素对软骨细胞内MMP-9表达的影响

3．3．3 黄芩素对软骨细胞内COX-2表达的影响

3．4 黄芩素对软骨细胞p65磷酸化及核转位的影响

3．4．1 黄芩素对软骨细胞细胞质中p65磷酸化及转位的影响

3．4．2 黄芩素对软骨细胞细胞核中p65磷酸化的影响

3．4．3 黄芩素对软骨细胞p65磷酸化及核转位的影响

4 讨论

4．1．2 黄芩素对MMP-9表达的影响

4．1．3 黄芩素对COX-2表达的影响

4．2 黄芩素对软骨细胞p65磷酸化及转位的影响

5 结论

致谢

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文