声明
1 文献综述
1.1 HPV研究进展
1.1.1 HPV的发现
1.1.2 HPV的分子生物学特征及分类
1.1.3 HPV基因组结构特征
1.1.4 HPV流行病学研究
1.1.5 HPV的致病机制研究
1.2 HPV筛查及疫苗的研究进展
1.2.1 HPV的筛查
1.2.2 HPV疫苗的研究
1.3 噬菌体展示技术简介
1.4 噬菌体展示技术的应用
1.4.1 抗原表位的研究
1.4.2 新型疫苗的研究
1.5 研究的目的及意义
1.6 本研究的主要内容
1.6.1SUMO-HPV45 L1蛋白的表达及纯化
1.6.2抗HPV45 L1蛋白单克隆抗体的制备
1.6.3HPV45 L1蛋白抗原表位的筛选
2SUMO-HPV45 L1蛋白的表达纯化及鉴定
2.1 实验材料
2.1.1 菌株
2.1.2 主要耗材及试剂
2.1.3 主要仪器设备
2.1.4 常用试剂配制
2.2 实验方法
2.2.1SUMO-HPV45 L1蛋白的初步表达及鉴定
2.2.2SUMO-HPV45 L1蛋白诱导表达条件的优化
2.2.3SUMO-HPV45 L1蛋白的纯化及鉴定
2.2.4 血凝实验
2.3 实验结果
2.3.1SUMO-HPV45 L1蛋白初步表达及鉴定结果
2.3.2 L1蛋白诱导表达条件优化结果
2.3.3 L1蛋白纯化及鉴定结果
2.3.4 血凝实验结果
2.4 讨论
2.4.1 L1蛋白的表达
2.4.2 L1蛋白的纯化
2.5 小结
3抗HPV45 L1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
3.1 实验材料
3.1.1 主要耗材及试剂
3.1.2 主要仪器设备
3.1.3 常用试剂配制
3.1.4 动物及细胞
3.2 实验方法
3.2.1 免疫小鼠
3.2.2 间接ELISA法测小鼠血清效价
3.2.3 骨髓瘤细胞的培养
3.2.4 饲养细胞的制备
3.2.5 脾细胞的制备
3.2.6 细胞融合
3.2.7 杂交瘤细胞阳性孔的筛选
3.2.8 阳性杂交瘤细胞的亚克隆
3.2.9 单克隆抗体的大量制备及腹水的纯化
3.3 单抗的鉴定
3.3.1 单抗浓度及纯度的测定
3.3.2 单抗效价的测定
3.3.3 单抗亲和力的测定
3.3.4 间接免疫荧光实验（IFA）鉴定单抗3C11
3.3.5 单抗交叉反应性的测定
3.4 实验结果
3.4.1 阳性杂交瘤细胞株筛选及效价测定结果
3.4.2 单抗浓度及纯度测定结果
3.4.3 单抗效价测定结果
3.4.4 单抗亲和力测定结果
3.4.5 间接免疫荧光实验结果
3.4.6 单抗交叉反应性鉴定结果
3.5 讨论
3.5.1 影响细胞融合的因素
3.5.2 筛选阳性杂交瘤细胞株
3.5.3 单抗的制备
3.6 小结
4HPV45 L1蛋白抗原表位的筛选
4.1 实验材料
4.1.1 主要耗材及试剂
4.1.2 主要仪器设备
4.1.3 常用试剂配置
4.2 实验方法
4.2.1 第一轮淘选噬菌体
4.2.2 第一轮淘选噬菌体的扩增与纯化
4.2.3 洗脱产物与扩增产物的滴度测定
4.2.4 第二、三轮生物淘选
4.2.5 噬菌斑的扩增与纯化
4.2.6 间接ELISA鉴定噬菌体克隆
4.2.7 对阳性噬菌体克隆进行测序
4.2.8 多肽的合成及抗原表位的鉴定
4.3 实验结果
4.3.1 三轮噬菌体淘选结果
4.3.2 间接ELISA鉴定阳性克隆结果
4.3.3 阳性噬菌体克隆测序结果
4.3.4 抗原表位的鉴定结果
4.4 讨论
4.4.1 去污剂、靶分子的浓度及淘选轮数
4.4.2 L1蛋白表位的序列分析
4.5 小结
5 实验结论
参考文献
附录 英文缩写词汇表
个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果
致谢
郑州大学;
