产MCR--8.2和NDM--1的高黏性肺炎克雷伯菌耐药和毒力分子特征研究

目录

声明

英文缩略表（Abbreviations）

第一章 前言

1.1 耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）概述

1.1.1 CRKP 简介

1.1.2 CRKP 在国内、外的流行

1.1.3 高毒力肺炎克雷伯菌

1.1.4 CR-hvKP 的出现及危害

1.2 可水平转移的多粘菌素耐药基因mcr

1.2.1 mcr 基因的简介

1.2.2 mcr-8基因的发现

1.2.3 mcr 基因在CRE 中的传播

1.3 结语

第二章 同时耐替加环素和多粘菌素CRKP的发现及分子特征研究

2.1 实验材料

2.1.1 菌株

2.1.2 实验仪器

2.1.3 实验试剂

2.1.4 溶液及培养基的配制

2.2 实验方法

2.2.1 最低抑菌浓度（Minimum inhibitory concentration，MIC）测定

2.2.2 拉丝实验

2.2.3 耐药基因的检测

2.2.4 接合转移

2.2.5 电转实验

2.2.6 S1-PFGE 和Southern 杂交

2.2.7 全基因组测序

2.3 结果与讨论

2.3.1 药敏结果和黏性表型

2.3.2 定位分析

2.3.3 全基因组测序

2.3.4 mcr-8.2质粒分析

2.4 讨论

第三章 KP18-29 的毒力分析

3.1 实验材料

3.1.1 菌株

3.1.2 实验动物

3.1.3 实验仪器

3.1.4 实验试剂

3.2 实验方法

3.2.1 小鼠致死量测定

3.2.2 组织HE 染色

3.2.3 毒力因子推定

3.3 结果与讨论

3.3.1 小鼠致死率测定和组织病理切片

3.3.2 毒力因子分析

3.4 讨论

第四章 磷酸乙醇胺转移酶MCR-8.2 蛋白的表达和纯化

4.1 实验材料

4.1.1 表达菌株及载体

4.1.2 实验仪器

4.1.3 实验试剂

4.1.4 引物设计及合成

4.1.5 溶液的配制

4.2 实验方法

4.2.1 目的基因的扩增

4.4.2 载体质粒的提取

4.2.3 载体质粒的酶切

4.2.4 目的基因PCR 产物及酶切载体的纯化

4.2.5 感受态细胞的制备

4.2.6 MCR-8.2 重组质粒的构建与鉴定

4.2.7 目的蛋白的小量表达

4.2.8 目的蛋白的大量表达及纯化

4.3 实验结果

4.3.1 以pET-28a（+）为载体的蛋白小量表达

4.3.2 以pSUMO 为载体的蛋白小量表达

4.3.3 以pGEX-6P-1 为载体的蛋白小量表达

4.3.4 不同诱导温度的蛋白小量表达

4.3.5 不同盐浓度的蛋白小量表达

4.3.6 部分片段的蛋白大量表达与纯化

4.4 讨论

结论与创新点

参考文献

附录

个人简历

致谢