获得性免疫缺陷综合征中医证型与CD4+T细胞主要亚群及其关键转录因子的相关性研究

摘要

目的：　　分析获得性免疫缺陷综合征不同中医证型CD4+T细胞亚群Th1、Th2、Th9、Th17、Th22、Tfh、Treg及其相应转录因子T-bet、GATA-3、PU.1、ROR-γt、AHR、Bcl-6、FOXP3的变化特征，探讨中医证型与CD4+T细胞亚群之间的联系，为艾滋病中医微观辨证奠定基础。　　方法：　　筛选2014年6月至2015年5月期间河南中医药大学第一附属医院艾滋病研究中心门诊HIV/AIDS患者72例，同时选取20例来自体检中心的健康人作为健康对照组。依据国家标准及艾滋病专家组意见对HIV/AIDS患者进行辨证分型。采用流式细胞术（FCM）检测CD4+T细胞亚群 Th1（CD4+IFN-γ+）、Th2（CD4+IL4+）、Th9（CD4+IL9+）、Th17（CD4+IL17+）、Th22（CD4+IL22+）、Tfh（CD4+CXCR5+ICOS+）、Treg（CD4+CD25+Foxp3+）细胞的百分比。Real time-PCR技术检测其外周血单个核细胞（PBMC）中转录因子T-bet、GATA-3、PU.1、ROR-γt、AHR、Bcl-6、FOXP3 mRNA的相对表达量。分析不同证型CD4+T细胞亚群及其转录因子的特点。　　结果：　　1.中医证型基本情况分布：72例HIV/AIDS患者辨证分为6个证型，其中脾气虚弱证23例，占31.94%，肺脾气虚证9例，占12.50%，脾肾阳虚证3例，占4.17%，气血两虚证10例，占13.89%，湿热内蕴证15例，占20.83%，气阴两虚证12例，占16.67%。由此可见，脾气虚弱证最多见，湿热内蕴证、气阴两虚证和气血两虚证次之，肺脾气虚证和脾肾阳虚证相对少见。　　2.不同证型间CD4、CD8及CD4/CD8差异性分析：脾气虚弱证、脾肾阳虚证患者CD4+T细胞百分比明显低于其他证型（P＜0.05），湿热内蕴证最高，脾肾阳虚证最低；脾气虚弱证、脾肾阳虚证患者CD8+T细胞百分比明显高于其他证型（ P＜0.05），脾肾阳虚证最高，湿热内蕴证最低；湿热内蕴证CD4/CD8比值明显高于其他证型（P＜0.05），脾肾阳虚证明显低于其他证型（P＜0.05）。与健康对照组比较，不同证型HIV/AIDS各组患者CD4+T细胞百分比及CD4/CD8比值明显降低（P<0.05），CD8+T细胞百分比明显升高（P<0.05）。　　3.不同证型间Th1、Th2及其相关转录因子T-bet、GATA-3差异性分析：脾气虚弱证、肺脾气虚证、脾肾阳虚证患者Th1细胞百分比明显低于其他三组证型（P<0.05），T-bet表达量脾气虚弱证、脾肾阳虚证患者明显低于其他证型（P<0.05）；脾气虚弱证、脾肾阳虚证患者Th2细胞百分比明显高于其他证型（P<0.05），GATA-3表达量脾气虚弱证、肺脾气虚证、脾肾阳虚证患者明显高于其他证型（P<0.05）；脾气虚弱证、肺脾气虚证、脾肾阳虚证患者Th1/Th2偏移程度明显高于其他三组证型（P<0.05）。与健康对照组比较，不同证型HIV/AIDS各组患者Th1细胞百分比及T-bet表达明显降低（P<0.05），Th2细胞百分比及GATA-3表达明显升高（P<0.05），Th1/Th2平衡向Th2方向发生偏移。　　4.不同证型间Th17、Treg及其相关转录因子ROR-γt、FOXP3差异性分析：脾气虚弱证、肺脾气虚证患者Th17细胞百分比明显低于其他证型（P<0.05），湿热内蕴证患者Th17细胞百分比明显高于其他证型（P<0.05）；ROR-γt表达量脾气虚弱证、肺脾气虚证、脾肾阳虚证患者明显低于其他三组证型（P<0.05）；湿热内蕴证患者Treg细胞百分比明显低于其他证型（P<0.05）；FOXP3表达量湿热内蕴证、气阴两虚证患者明显低于其他证型（P<0.05）；脾气虚弱证、肺脾气虚证患者Th17/Treg偏移程度明显高于其他证型（P<0.05），湿热内蕴证患者Th17/Treg偏移程度明显低于其他证型（P<0.05）。与健康对照组比较，除湿热内蕴证外，其他证型HIV/AIDS各组患者Th17细胞百分比及ROR-γt表达明显降低（P<0.05），Treg细胞百分比及FOXP3表达明显升高（P<0.05），Th17/Treg平衡向Treg方向发生偏移。　　5.不同证型间Th9及其相关转录因子PU.1差异性分析：湿热内蕴证、气阴两虚证患者Th9细胞百分比明显高于其他证型（P<0.05）；PU.1表达量脾气虚弱证、肺脾气虚证患者明显低于其他证型（P<0.05），湿热内蕴证、气阴两虚证患者明显高于其他证型（P<0.05）。与健康对照组比较，不同证型HIV/AIDS各组患者Th9细胞百分比明显升高（P<0.05），PU.1表达量明显升高（P<0.05）。　　6.不同证型间Th22及其相关转录因子AHR差异性分析：脾气虚弱证、肺脾气虚证、脾肾阳虚证患者Th22细胞百分比明显高于其他证型（P<0.05）；AHR表达量脾气虚弱证、肺脾气虚证、脾肾阳虚证患者明显高于其他证型（P<0.05），气阴两虚证患者明显低于其他证型（ P<0.05）。与健康对照组比较，不同证型HIV/AIDS各组患者Th22细胞百分比明显降低（P<0.05），AHR表达量明显降低（P<0.05）。　　7.不同证型间 Tfh及其相关转录因子 Bcl-6差异性分析：各证型患者间Tfh细胞百分比差异不显著；Bcl-6表达量脾肾阳虚证患者明显高于湿热内蕴证（P<0.05），其他各组间无显著性差异。与健康对照组比较，不同证型HIV/AIDS各组患者Tfh细胞百分比明显升高（P<0.05），Bcl-6表达量明显升高（P<0.05）。　　结论：　　1.HIV/AIDS患者证型以虚证居多，实证较少。脾气虚弱证最多见，湿热内蕴证，气阴两虚证和气血两虚证次之，肺脾气虚证和脾肾阳虚证相对少见。这提示气虚是HIV/AIDS患者的主要证素和症状特点，其中尤以脾气虚为多见。　　2.Tfh细胞各证型间差异不大，其他细胞亚群（Th1、Th2、Th9、Th17、Th22、Treg）各证型间都呈现出不同程度的差异，其中尤以脾气虚弱证、脾肾阳虚证及湿热内蕴证与其他各组的差异最大。这提示艾滋病中医证型与 CD4+T细胞不同亚群具有一定的相关性，临床上可以通过检测艾滋病患者CD4+T细胞不同亚群的比例辅助进行证型的识别。

目录

声明

缩略词表

前言

对象与方法

1. 研究对象

2 主要仪器与试剂

3 研究方法

结果

1中医证型基本情况分布

2不同证型间CD4、CD8及CD4/CD8差异性分析

3不同证型间 Th1、Th2及其相关转录因子T-bet、GATA-3差异性分析

4不同证型间 Th17、Treg及其相关转录因子ROR-γt、FOXP3差异性分析

5不同证型间Th9及其相关转录因子PU.1差异性分析

6不同证型间 Th22及其相关转录因子AHR差异性分析

7不同证型间 Tfh及其相关转录因子Bcl-6差异性分析

讨论

1.中医对艾滋病病因病机的认识

2.艾滋病中医证型分布演变规律及其与生物学指标的相关性研究

3.艾滋病中医证型与CD4+T淋巴细胞不同亚群相关性分析

结论

致谢

参考文献

附录1 附图

附录2 文献综述:艾滋病中医证候生物学实质的研究进展

附录3