龟羚帕安丸对PD大鼠模型神经干细胞移植后中脑黑质DAT、Brn4的影响

摘要

目的：　　成功建立PD大鼠模型，培养神经干细胞，完成BrDU标记与检测，并行神经干细胞移植。研究龟羚帕安丸对PD大鼠神经干细胞移植后存活状况及中脑黒质DAT、Brn-4的影响。探索龟羚帕安丸提高PD大鼠模型移植后神经干细胞存活率的机制是否与提高大鼠中脑黒质DAT、Brn-4有关，为其治疗PD提供更为可信的药理依据，造福更多PD患者。　　方法：　　制备孕鼠，将Ed14的大鼠断头处死，无菌条件下取出胎脑，剥离出海马组织制备单细胞混悬液，接种入培养瓶内。使用无血清体外培育技术来培养及传代，免疫细胞化学法鉴定所培养细胞的Nestin蛋白表达情况，以明确其为NSCs。鉴定完成之后，将传代培养得到的NSCs制为细胞悬液，移植手术的前一天，于悬液中加入BrdU对细胞进行标记。将建立成功的PD大鼠模型随机分组。麻醉后，固定于脑立体定向仪上，采用两点移植法，定位于大鼠毁损同侧纹状体。空白组移植同等量生理盐水，其余各组移植入标记成功的神经干细胞。术后腹腔注射0.5ml（160mg/kg）青霉素，连续注射7d，单笼常规喂养。从移植术后算起，在28d对各组大鼠进行APO诱发的大鼠旋转行为观察并详细记录。荧光显微镜观察:观察大鼠行为学变化后分别对各组大鼠处死取脑，中脑和纹状体冠状冰冻切片，在荧光显微镜下观察移植细胞在大鼠脑内的存活情况,并对Brdu阳性细胞进行计数，各组冰冻切片后免疫组化法检测DAT、Brn4表达。　　结果：　　与空白组、模型组比较，中药低剂量、中剂量、高剂量组、美多芭组大鼠旋转圈数改善率明显偏高(P﹤0.05)。与模型对照组比较，中药低剂量、中剂量、高剂量组、美多芭组大鼠中脑黒质Brdu明显升高(P﹤0.05)。与模型对照组比较，中药中剂量、高剂量组、美多芭组大鼠中脑黒质Brn-4含量明显升高(P﹤0.05)。与模型对照组比较，中药中剂量、高剂量组、美多芭组大鼠中脑黒质DAT含量明显升高(P<0.05)。　　结论：　　1、通过6-OHDA中脑黑质致密部单点注射法可以得到较为理想的PD动物模型。　　2、龟羚帕安丸可以有效改善PD大鼠症状，且中剂量组效果最佳。　　3、龟羚帕安丸低剂量、中剂量、高剂量组、美多芭组大鼠中脑黒质Brdu含量均有提高。且龟羚帕安丸中剂量组、低剂量、高剂量均优于美多芭组，以中剂量组最佳。提示龟羚帕安丸、美多芭可能通过调节相关因子提高神经干细胞存活率。4通过对各组大鼠脑组织Brn-4、DAT含量的比较，可以发现，龟羚帕安丸、美多芭均能提高大鼠中脑黒质Brn-4、DAT含量，说明提高帕金森病大鼠中脑黒质Brn-4、DAT含量可能是龟羚帕安丸、美多芭起到治疗作用的机制之一。

目录

声明

前言

材料与方法

结果

实验2 6-OHDA单点注射建立帕金森病大鼠模型的研究

材料与方法

结果

实验3 龟羚帕安丸与PD大鼠模型移植神经干细胞后行为学关系的观察

结果

实验4 龟羚帕安丸与PD 大鼠移植神经干细胞后Brn-4、DAT含量相关性的研究

结果

讨论

1 中医“肾-脑相关”理论与“神经干细胞-神经细胞”之间的关系

2 关于PD 大鼠模型

3 神经干细胞Brdu 检测结果

4 龟羚帕安丸对PD 大鼠模型移植神经干细胞后行为学的影响

5 龟羚帕安丸与PD 大鼠模型移植神经干细胞后中脑黒质Brn-4、DAT 的量效关系

6 关于中西医结合的几点思考

结论

致谢

参考文献

附录

附录1 图片

附录2文献综述:帕金森病神经干细胞移植实验研究进展

附录3 在校期间发表论文