胃癌患者外周血HLA-DR阳性单个核细胞PTEN的表达及其对PI3K/AKT信号通路的影响

摘要

目的：　　1.检测胃癌患者外周血中HLA-DR阳性细胞的相对表达量。　　2.从基因和蛋白质水平分析胃癌患者HLA-DR阳性单个核细胞PTEN及PI3K/AKT信号通路特点，探讨PI3K/AKT信号通路在HLA-DR阳性单个核细胞中的调控作用。　　方法：　　收集37例胃癌患者和33例健康人5ml EDTA抗凝的外周血液标本，通过流式细胞分析仪检测上述标本HLA-DR细胞的相对表达量。采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell，PBMC）。HLA-DR阳性细胞的分选：用免疫磁珠法手工分选PBMC内HLA-DR阳性和阴性细胞。将分选后的HLA-DR阳性和阴性细胞分别进行核酸和蛋白质的提取，检测基因和蛋白质水平上的PTEN、PI3K、AKT、mTOR相对表达量，分析PI3K/AKT信号通路对HLA-DR阳性细胞的调节作用。以上实验数据重复三次，取其均数，结果以?X±S的形式描述，采用SPSS18.0进行统计数据处理，对于符合正态分布的数据组间差异性分析采用方差分析。P<0.05时有统计学差异。　　结果：　　1.流式结果显示，HLA-DR细胞在胃癌患者与健康人外周血的相对百分比分别为[（13.11±3.01）%vs（9.02±1.42）%]。方差分析结果显示，P=0.01，<0.05，俩组数据存在差异。提示胃癌发生时，HLA-DR细胞在外周血的相对表达量明显高于健康对照组。　　2.Realtime PCR结果显示，健康人HLA-DR阳性细胞基因PI3K,mTOR的相对表达量高于HLA-DR阴性细胞，AKT的相对表达量无明显差异，但是，PTEN的表达却相反，在健康人HLA-DR阳性细胞的表达量低于阴性细胞，提示我们健康状态下， HLA-DR阳性细胞 PTEN低表达有利于此类细胞PI3K信号通路的活化；肿瘤病人，PI3K，mTOR在HLA-DR阳性细胞的相对表达量高于阴性细胞，与健康人相同，但是，PTEN在阳性细胞中的表达量显著高于阴性细胞，于是我们推测，胃癌状态下，PTEN在肿瘤患者HLA-DR阳性细胞的高表达有可能成为HLA-DR阳性细胞PI3K信号通路的负性调控因素；之后，我们又分别比较了胃癌患者和健康人HLA-DR阴性和阳性细胞PI3K通路基因的表达，发现俩组人群，HLA-DR阴性细胞PI3K信号通路基因表达的差异性不显著，然而，HLA-DR阳性细胞却有明显差异，PI3K，mTOR在胃癌患者的表达明显低于健康对照，这意味着在基因水平上，胃癌患者HLA-DR阳性细胞PI3K信号通路的活化不如健康人群 HLA-DR细胞。　　3.Westernblot结果显示，PTEN在健康人HLA-DR阴性及阳性细胞的表达量分别为1.27±0.52，0.78±0.24，胃癌患者HLA-DR阴性及阳性细胞PTEN的表达量为2.55±1.20,3.17±1.39，以上数据方差分析后获悉，F=15.07，P=0.000，PTEN的表达量组间与组内差异比较均有意义，其中，胃癌患者HLA-DR阳性细胞PTEN表达量增高尤为显著；PI3K在健康人HLA-DR阴性及阳性细胞的表达量分别为0.58±0.18，1.51±0.47，胃癌患者HLA-DR阴性及阳性细胞PI3K的表达量为1.38±0.61，2.12±0.54，方差分析结果显示，F=10.21，P=0.000，PI3K的表达量在各组之间的差异有统计学意义，PI3K在胃癌HLA-DR阳性细胞的相对表达量最高；AKT在健康人HLA-DR阴性及阳性细胞的表达量分别为0.77±0.24，0.64±0.16，胃癌患者HLA-DR阴性及阳性细胞AKT的表达量为0.94±0.19，1.02±0.24，方差分析结果显示F=5.41,P=0.007，AKT在各组间的表达亦有显著性差异，AKT在胃癌HLA-DR阳性细胞的表达量也相对增高。　　结论：　　1.胃癌发生后，HLA-DR的表达量增加，APCs细胞抗原呈递能力增强，意味着肿瘤发生时，机体免疫系统抗肿瘤能力增强。　　2.PTEN在胃癌HLA-DR阳性单个核细胞基因和蛋白水平都呈现高表达，在一定程度上可以抑制PI3K/AKT/mTOR信号同路的过度活化，抑制HLA-DR细胞的过度增殖，提供有节制性的免疫应答，减少了免疫应答造成机体二重损伤的风险。

目录

声明

缩略词

前言

材料与方法

1.研究对象

2.实验材料

3.实验方法

结果

1. 流式结果

2. RT-PCR结果

3. Westernblot 结果

讨论

结论

参考文献

附录1 文献综述:PTEN在肿瘤过程中的生物学作用及调控

附录2在校期间论文论著和科研情况等

致谢