消瘀化痰饮对非酒精性脂肪肝大鼠肝组织PPARαmRNA表达的影响

摘要

目的：消瘀化痰饮(由丹参、郁金、泽泻、制半夏、海藻、柴胡、决明子、生大黄、生黄芪、炒白术等组成)具有消瘀化痰、疏肝健脾的功效，为导师临床观察筛选的效方，对非酒精性脂肪肝(NAFLD)具有较好的治疗效果，为了进一步探讨其作用机理，参照相关文献运用高脂饲料喂饲大鼠复制NAFLD模型，同时施加药物干预，观察了其对NAFLD大鼠脂质代谢、肝功能及肝组织PPARαmRNA表达的影响，探讨了其促进脂质代谢、保护肝功能和增强PPARαmRNA表达的作用机制，并运用光镜和电镜观察了本方对肝组织形态学的影响。 方法: 第一部分消瘀化痰饮对NAFLD大鼠脂质代谢和肝组织形态学的影响选用SD大鼠50只，体重160～180g，雄性。大鼠自由饮水进食，饲养于18℃～22℃明暗各12小时的清洁级动物实验室内。正常喂养1周后，随机分为5组：正常对照组(简称正常组，normal control group，N)、模型对照组(简称模型组，model group，M)、消瘀化痰饮高剂量组(简称高剂量组，high-dose xiaoyuhuatanyin group，H)、消瘀化痰饮低剂量组(简称低剂量组，low-dose xiaoyuhuatanyin groupgroup，L)、阳性药(东宝甘泰)对照组(简称对照组，dongbaoganmi control group，D)。计算。除正常组喂饲普通饲料外，其余各组均喂饲高脂饲料。同时，各治疗组灌服治疗药或对照药，正常组与模型组灌服等量生理盐水，每天上午灌胃1次，持续灌胃8周，每次用药体积均按1ml/100g计算。9周末，于最后1次给药后禁食12h麻醉状态下股动脉取血，将血样低温离心，分离血清，密封，-20℃冷贮备用。于肝脏最大叶距边缘0.5cm处取0.1×0.1×0.1cm3肝组织浸泡于4％戊二醛中固定，以备电镜观察。另取少许肝组织液氮冷冻以备检测肝匀浆TG、TC的含量，然后取相同部位肝组织0.5×0.5×0.5cm3置于4％多聚甲醛液中固定，石蜡包埋，切片，HE染色，以备光镜观察。第二部分　消瘀化痰饮对NAFLD大鼠肝组织PPARαmRAN表达的影响实验动物分组、用药情况同前。连续灌胃8周，确定脂肪肝形成后，于最后1次给药禁食12h后麻醉动物，剖取肝脏，在肝脏最大叶距边缘0.5cm处取少许肝组织，液氮冷冻以备RT-PCR检测PPARαmRAN的表达。 结果: 第一部分　消瘀化痰饮对NAFLD大鼠脂质代谢和肝组织形态学的影响1 消瘀化痰饮对NAFLD大鼠血清TG、TC、FFA含量的影响模型组大鼠血清TG、TC、FFA的含量(1.17±0.096、3.27±0.18、480.475±18.94)明显高于正常组(0.56±0.084、1.45±0.20、225.71±15.98)(P<0.01)，显示NAFLD大鼠存在着明显的脂质代谢紊乱。经用药干预，各用药组均能显著降低模型大鼠血清TG、TC、FFA的含量，与模型组比较均具有显著性差异(P<0.01)。其中高剂量组大鼠血清TG、TC、FFA的含量(0.52±0.065、1.44±0.11、221.43±15.32)和低剂量组的含量(0.57±0.059、1.56±0.13、241.42±16.96)较对照组的含量(0.76±0.070、2.06±0.28、331.90±16.32)均明显降低(P<0.01)。而高、低剂量组之间经统计学处理无明显差异(P>0.05)。 2 消瘀化痰饮对NAFLD大鼠AST、ALT活性的影响模型组大鼠血清AST、ALT的活性(32.37±2.45、15.84±1.01)明显高于正常组的活性(26.59±2.33、10.89±0.86)(P<0.01)。经用药干预，各用药组大鼠血清AST、ALT的活性均有明显的下降，与模型组比较，差异有显著性(P<0.01)。且低剂量组AST的活性(19.45±1.90)较对照组的活性(23.19±1.78)低(P<0.05)；高剂量组ALT的活性(4.16±0.89)优于对照组的活性(7.32±0.45)(P<0.05)，而高、低剂量组之间AST、ALT的活性经统计学处理无明显差异(P>0.05)。 3.消瘀化痰饮对NAFLD大鼠肝脏TG、TC含量的影响模型组大鼠肝脏TG、TC的含量(0.82±0.08、0.44±0.07)明显高于正常组的含量(0.45±0.05、0.27±0.04)(P<0.01)。经用药干预，各用药组均能显著降低模型大鼠肝组织TG、TC的含量(P<0.01)。且高剂量组TC的含量(0.27±0.04)低于对照组的含量(0.34±0.05)(P<0.05)，而高、低剂量组TC的含量经统计学处理无明显差异(P>0.05)；各用药组TG的含量经统计学处理无明显差异(P>0.05)。 4 肝脏组织形态学改变光镜可见：正常组大鼠肝组织结构完整、清晰，肝小叶结构正常，中央静脉大而壁薄，肝细胞排列成肝索，在中央静脉周围呈放射状分布，细胞呈多边形。模型组大鼠肝细胞中度细胞水肿，少量的肝细胞坏死，多数肝细胞内可见大小不等、数量不一的脂滴空泡(脂肪变性)，重度变性者，脂滴空泡融合，呈现中至重度脂肪变性，但未见明显的纤维化改变。各治疗组动物肝小叶和肝血窦结构清晰，高、低剂量组肝细胞内脂滴空泡基本消失，对照组中少量的肝细胞内仍有脂滴空泡，并有轻度的细胞水肿。 透射电镜可见：正常组大鼠肝脏细胞质中线粒体、粗面内质网等基本正常；模型组细胞质内充满了大、小不同的脂滴，线粒体全部脊融合、消失；粗面内质网有轻度脱颗粒现象。对照组细胞胞浆内可见大、小不等脂滴，线粒体肿胀、内质网有部分断裂现象。高、低剂量组上述情况明显改善，肝细胞胞浆有少量脂滴，线粒体形态基本正常，脊数目明显增多，仅部分可见轻度肿胀变形，内质网基本正常。 第二部分　消淤化痰饮对NAFLD大鼠肝组织PPAEαmRAN表达的影响RT-PCR后，琼脂糖凝胶电泳，在239bp、587bp处分别显示出PPARα和β-actin电泳带，与预期结果一致。且模型组大鼠肝组织PPARamRNA(0.220±0.020)的表达显著低于正常组(0.419±0.023)的表达(P<0.01)。给药后，各用药组肝组织PPARamRNA的表达显著高于模型组的表达(P<0.01)，且高、低剂量组肝组织PPARαmRNA(0.341±0.020、0.351±0.017)的表达高于对照组(0.276±0.017)的表达(P<0.01)，而高、低剂量组之间无显著性差异(P>0.05)。 结论: 1.消瘀化痰饮能显著降低NAFLD大鼠血清和肝组织内异常升高的TC、TG、FFA的含量，抑制血清内ALT和AST活性的异常升高，呈现出良好的调脂护肝作用。 2.消瘀化痰饮可明显改善NAFLD大鼠肝组织的病变程度，表现为用药后大鼠肝小叶和肝血窦结构清晰，肝细胞内脂滴空泡基本消失；线粒体形态基本正常，脊数目明显增多。 3.消瘀化痰饮能增强NAFLD大鼠肝组织PPARαmRNA的表达，促进脂质的转运和脂肪的氧化分解，降低脂质在肝脏的沉积，从而达到治疗NAFLD的作用。

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摘要

引言

第一部分消瘀化痰饮对非酒精性脂肪肝大鼠脂质代谢和肝组织形态学的影响

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第二部分消瘀化痰饮对非酒精性脂肪肝大鼠肝组织PPARαmRAN表达的影响

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

结论

综述：非酒精性脂肪肝的中医药研究进展

致谢

个人简历