瑞芬太尼对异丙酚静脉麻醉药代动力学的影响

摘要

第一部分HPLC-UV法测定人血浆中瑞芬太尼浓度 目的：瑞芬太尼是一种新型的超短效阿片类受体激动剂，其结构独特，易被血浆和组织中的非特异性酯酶代谢，起效快，迅速达到血-脑平衡，作用消失也快，从而使麻醉的可控性明显提高，日益受到人们的关注。本实验通过建立高效液相色谱-紫外检测法测定人血浆中瑞芬太尼的浓度，旨在为临床用药提供实验数据，进而为临床合理用药提供理论依据。 方法：本文采用RP-HPLC外标法测定血浆样品中瑞芬太尼的浓度。先用1-氯丁烷萃取，再将药物反提至0.01 mol·L-1盐酸中，以spherisorb-CN(4.6 mm×250 mm，5μm，Waters)色谱分析柱为固定相；流动相为0.02 mol·L-1的NaH2PO4水溶液-乙腈(70:30)，内含三乙胺0.01％，流速1.5 mL·min-1，柱温为室温，紫外检测波长为210nm，进样量为200μL。通过对日内、日间精密度、提取回收率、线性范围和检测限的确定，进一步对方法学进行评价。 选择择期行胸科手术病人6例，ASAⅠ～Ⅱ级，年龄45～65岁，体重指数不超过30％。麻醉诱导用静脉注射瑞芬太尼4μg·kg-1复合异丙酚2.5 mg·kg-1，待病人意识消失后静脉注射罗库溴铵，行气管插管，持续吸入七氟醚，间断注射维库溴铵0.03 mg·kg-1维持肌松。分别在瑞芬太尼注射前和注射后1、2、3、5 min从肘正中静脉采血3 mL，置肝素试管中，迅速加入10 mg·mL-1枸橼酸60μL，充分摇匀后离心取上清液立即放入低温冰箱保存，用高效液相色谱仪测定瑞芬太尼血药浓度。 结果：在本实验建立的分析条件下，柱效良好，血浆中药物和基线分离良好且选择性高，在血药浓度5～300 ng·mL-1的线性范围内，以瑞芬太尼血浆浓度C(ng·mL-1)对其色谱峰面积(A)作线性回归，得瑞芬太尼的标准曲线方程为：Y=-1585+530.54X,r=0.9996(n=7)。血浆中瑞芬太尼的检测限为2.5 ng.mL-1。血浆高(200 ng·mL-1)、中(50 ng·mL-1)、低(10ng·mL-1)浓度的日内精密度分别为3.06％，5.13％和7.06％；日间精密度分别为5.33％，5.69％和8.91％。提取回收率分别为(88.99+2.20)％，(83.72±2.31)％和(83.47±1.76)％。冰中放置稳定性和冻存稳定性的RSD分别为5.52％和5.87％。冻融实验前后浓度与标示量的比值均小于15％。 结论：本实验建立了测定体内瑞芬太尼浓度的HPLC分析方法，该方法操作简便，分离度好，其专属性、准确度、精密度、线性范围及稳定性均适合实际样品的检测。 第二部分联合瑞芬太尼对异丙酚药代动力学的影响 目的：在复合麻醉时，异丙酚麻醉药和阿片类药物的相互作用关系复杂，确定两者的相互作用关系，研究二者的药代动力学相互作用具有重要的临床意义。本实验通过用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)对异丙酚体内血药浓度进行检测，研究联用瑞芬太尼前后对异丙酚在体内药代动力学的影响，为临床合理应用药物提供实验和理论依据。 方法：色谱条件： 采用反相高效液相色谱-荧光检测技术，美国Waters高效液相色谱系统，分离色谱柱为Waters Symmetry C18(3.9 mm×150 mm.5.0 μm)，保护柱为Symmetry C18，以甲醇和水(75：25)混合，加入冰醋酸调pH=4.0为流动相，荧光激发波长270nm，发射波长295 nm。流速：1.0 mL·min-1，柱温为室温，取上清液20μL进行HPLC分析。 血浆样品处理方法： 取血浆250μL，精密加入麝香草酚内标溶液(10μg·mL-1)10 μL和甲醇750 μL，旋涡振荡30 s，混匀，离心10 min(10000 rmin-1)，吸取上清液过滤(0.45 μm微孔滤膜)，取20 μL进样分析测定，重复两次取其平均值。 标准曲线方程的建立： 于空白血浆中分别加入异丙酚标准储备液，配制成浓度为16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625 μg·mL-1的系列血浆标准液，按上述“样品处理”操作，以样品吸收峰面积(As)与内标吸收峰面积(Ai)比值(Y)对样品浓度(C)作直线回归。 方法学考察： 考察方法的精密度、提取回收率和稳定性试验。 给药方法及血样采集： 选择择期行胸科手术病人21例，ASAⅠ～Ⅱ级，年龄40～65岁，体重指数不超过30％，拟行全麻下手术，分为3组(分别用Ⅰ～Ⅲ组表示)，每组7例(n=7)。第Ⅰ组：麻醉前30 min给予咪唑安定0.05 mg·kg-1和阿托品0.5 mg，连续监测桡动脉血压、心电图、脉搏血氧饱和度(SpO2)、呼气末二氧化碳分压(PETCO2)、脑电双频指数(BIS)和心率变异性各成分。麻醉诱导用静脉注射异丙酚2.5 mg·kg-1，待病人意识消失后静脉注射罗库溴铵，行气管插管，插管成功后，连接麻醉呼吸机维持通气，维持呼气末PETCO230～40 mmHg。持续吸入七氟醚，间断注射维库溴铵0.03 mg·kg-1维持肌松；第Ⅱ组：麻醉诱导用静脉注射异丙酚2.5 mg·kg-1和瑞芬太尼4μg·kg-1，其余同第Ⅰ组；第Ⅲ组：麻醉诱导用静脉注射异丙酚2.5 mg·kg-1和靶控输注瑞芬太尼6 ng·ml-1，其余同第Ⅰ组。 经前臂静脉注射异丙酚，分别于注射前和注射后2、4、6、10、15、30、45、60、90、120、180 min从右侧肘正中静脉采血2 mL，肝素抗凝，离心后取上层血浆于低温冰箱保存。 数据处理： 血浆样品结果应用DAS软件进行处理，计算房室模型和药代动力学参数，SPSS软件包进行统计分析。 结果：血浆中异丙酚测定方法学认证： 异丙酚的色谱行为及专一性： 本实验建立了血浆中异丙酚的RP-HPLC检测方法，异丙酚和麝香草酚均有较大的吸收峰，分离效率好、专属性强。异丙酚的保留时间约为6 min，内标麝香草酚的保留时间约为4 min，且血浆中杂质或内源性物质均不干扰异丙酚的测定。 回归方程和检测限： 标准曲线方程为：Y=1.5826X-0.1264(r=0.9996，n=9)。说明血浆中异丙酚浓度在0.0625～16 μg·mL-1范围内线性关系良好，本实验条件测得异丙酚的检测限为0.03 125μg·mL-1。 血浆样品回收率与精密度考察： 结果表明，在高、中、低(分别为8，1，0.125μg·mL-1)三个浓度下提取回收率分别为84.32±1.17，83.21±1.24，79.854±1.50，日内及日间RSD均小于5.90％。 单用异丙酚与联用瑞芬太尼后的异丙酚药动学研究： 结果表明，三组病人单次静脉注射异丙酚2.5 mg·kg-1后血浆浓度迅速下降。患者性别，年龄，收缩压，舒张压，心率，差异无统计学意义(P>0.05)。异丙酚药代动力学模型符合二室开放模型。药代动力学参数：分布半衰期(T1/2α)，消除半衰期(T1/2β)，浓度-时间曲线下面积(AUC)，清除率(CL)及中央室容积(Vc)，各组间比较无显著性差异(P>0.05)。 结论：RP-HPLC法测定血浆异丙酚浓度，方法简便，准确，灵敏度高，重现性好，适用于临床异丙酚血药浓度监测及药代动力学研究。 静脉注射和靶控输注瑞芬太尼不影响异丙酚药代动力学特征。

目录

论文说明：英文缩语简表

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摘要

第一部分HPLC-UV法测定人血浆中瑞芬太尼浓度

前言

仪器与试剂

方法与结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

第二部分联合瑞芬太尼对异丙酚药代动力学的影响

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 瑞芬太尼的研究进展

致谢

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