降脂通络软胶囊对高脂血症大鼠血管内皮的干预作用

摘要

目的：高脂血症(Hyperlipemia,HLP)导致的血管内皮(blood vessel endothelium，BVE)功能障碍是许多心血管疾病发生的始动因素，因此，改善血管内皮功能已成为防治心血管疾病的一种新型治疗靶点。羟甲基戊二酰辅酶A(hydroxy-methyl-glutaryl coenzyme A，HMG-CoA)还原酶抑制剂如辛伐他汀、普伐他汀降脂作用疗效肯定，但其有横纹肌溶解、肝功能损伤等副作用且疗效的持续性、长期服用的安全性一直是治疗的难题。近年来有大量研究表明，中药可从不同环节干预高脂血症，且效果明显。降脂通络软胶囊(JZT)的主要成分为姜黄素(Curcumin)，姜黄素为常用中药—姜黄提取的有效成分，具有理气活血、祛痰降浊等功效，主要用于治疗气滞血瘀型高脂血症。药理药效学研究表明，该药能明显降低甘油三酯(TG-C)、胆固醇(TC-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)，提高高密度脂蛋白(HDL-C)的含量，具有抗氧化作用。本次研究拟利用高脂饲料复制高脂血症大鼠模型，观察降脂通络软胶囊对高脂血症引起的血管内皮损伤的干预作用，并探讨其可能的作用机制。 方法： 1 实验动物、分组及模型复制：大鼠60只，体重200～250g。普通喂养动物1周。一周后禁食不禁水12小时眶内采血检测血脂，均为正常者用于实验。根据体重排序，然后随机分 为4组：即空白对照组(简称正常组)15只、模型对照组(简称模型组)15只、西药治疗组(简称辛伐他汀组)15只、降脂通络软胶囊治疗组(简称降脂通络软胶囊组)15只。除正常组外，其他3组自实验第一天起喂饲高脂饲料，正常组喂饲普通饲料。第4周末禁食不禁水12小时眶内采血检测血脂，模型组血脂升高且稳定后，确认为高脂血症。模型各组第4周末确定为高脂血症后，按血脂水平重新分组，组别与动物数不变。 2 治疗方法：于第5周起开始灌胃给药。降脂通络软胶囊组灌服降脂通络软胶囊0.571g·kg<'-1>·d<'-1>，西药组灌服辛伐他汀5.71mg·kg<'-1>·d<'-1>；正常组和模型组灌以相应量的生理盐水。各组灌胃共6周。 3 观察指标及方法： 3．1至10周末，10％水合氯醛腹腔麻醉后，无菌操作，打开腹腔，从大鼠下腔静脉采血，提取血清以酶比色法检测TC、TG、LDL-C、HDL-C；黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)、硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)。提取血浆采用放射免疫法测定血栓素B<,2>(Thromboxane B<,2>，TXB<,2>)、6-酮-前列腺素F<,1α>(6-Keto-PGF<,1α>)。 3．2分离主动脉直至髂动脉分叉处，剪断，彻底清除其周围的结缔组织，冰盐水冲洗，随机取材，取一部分置于4％多聚甲醛固定，用于光镜观察，使用计算机图象分析系统(HMIAS-2000)进行半定量分析，测量内膜厚度及中膜厚度；再取一部分置于2.5％戊二醛固定，用于电镜观察。 3．3分离主动脉随机取材，4％多聚甲醛固定，逐级酒精脱水，石蜡包埋，切片，免疫组织化学染色法检测内皮细胞选择素(E-selectin)，用免疫酶标技术(SP法)。 结果： 1 实验大鼠一般状况 正常组大鼠食欲正常，反应敏捷，毛色光泽，皮下脂肪厚，粪便呈麦粒状。其他三组实验开始时有厌食，一周后恢复正常，反应敏捷，被毛有光泽，饮水、便质、尿量正常。实验第6周鼠尾均有不同程度的结节形成，凸出皮肤，模型组多数鼠头部及臀部出现脱毛，被毛竖起。 2 各组大鼠血脂变化的比较并根据公式计算动脉硬化指数(atherogenic index,AI)：AI=(TC-HDL-C)/HDL-C 模型组血清TC、TG、LDL-C和AI均较正常组显著升高(P<0.01)，HDL-C亦较正常组升高(P<0.05)，与模型组比较，两治疗组血清TC、TG、LDL-C和AI含量显著降低，HDL-C显著升高(P<0.01)，两治疗组间TC差异显著(P<0.05)，其余指标无显著性差异(P>0.05)，两治疗组间无显著差异(P>0.05)。 3 主动脉形态学改变 3．1光镜观察及主动脉形态学改变半定量分析结果 3．1．1光镜观察 正常组动脉内膜光滑完整，内膜下间隙较小；模型组血管壁增厚，内皮细胞(endothelial cell,EC)广泛损伤脱落，脂质沉积，内皮下间隙增宽；降脂通络软胶囊组内膜基本完整，单层内皮细胞连接尚紧密，与模型组相比，脂质条纹明显减少；辛伐他汀组动脉内膜增厚、内皮细胞损伤及脂质沉积等病理改变较轻，可见EC缺失。 3．1．2主动脉形态学改变半定量分析结果 正常组主动脉内膜光滑，肉眼无脂质形成，组织学切片示内皮细胞结构完整，内皮下无泡沫细胞沉积；模型组主动脉内膜/中膜厚度之比达1.03±0.27，较正常组显著升高(P<0.01)，辛伐他汀组和降脂通络软胶囊组主动脉内膜/中膜厚度比值显著低于模型组(P<0.01)，降脂通络软胶囊组主动脉内膜/中膜厚度比值低于辛伐他汀组(P<0.05)。 3．2扫描电镜观察 正常组EC界限清楚，排列规整，连接紧密。模型组部分呈收缩状态，体积缩小，细胞间隙增大或出现深大裂隙；EC胞膜表面呈大小不等的虫蚀状、火山口状缺损，并可见大片EC崩解，甚至脱落仅余残基，区内有血小板、血细胞和细胞碎屑纤维素等附着。两治疗组EC较完整，排列较整齐，可见少量EC缺损，细胞膜部分破坏，呈小洞状。 3．3透射电镜观察 正常组EC完整，细胞间连接紧密，胞质互相覆盖；模型组EC间连接处胞质分离，变直、变宽，出现较大间隙，并可见单核细胞(MC)黏附于内皮表面。大部分EC残缺、脱落，表面有血小板黏附。两治疗组可见EC较完整，覆盖于内膜表面，细胞连接较好，MC黏附减少。 4 各组大鼠SOD活性及MDA含量的比较 与正常组比较，模型组大鼠血清SOD活性明显降低(P<0.05)，MDA含量则显著增高，(P<0.01)；与模型组比较，两治疗组血清SOD活性显著升高(P<0.01)，MDA含量显著降低(P<0.01)。两治疗组相比，降脂通络软胶囊组SOD活性高于辛伐他汀组，MDA含量低于辛伐他汀组，但两指标两组间无统计学意义(P>0.05)。 5 各组大鼠TXB<,2>、6-Keto-PG<,1α>含量的比较 与正常组相比，模型组大鼠血浆TXB<,2>含量明显升高(P<0.01)，6-Keto-PGF<,1α>含量显著降低(P<0.01)。两治疗组与模型组相比，血浆TXB<,2>水平明显下降(P<0.01)，血浆6-Keto-pnF<,1α>水平明显上升(P<0.01，P<0.05)；两治疗组比较，血浆TXB<,2>水平无统计学差异(P>0.05)，血浆6-Keto-PGF<,1α>水平降脂通络软胶囊组高于辛伐他汀组(P<0.01)。 6主动脉E-selectin的免疫组化结果 E-selectin主要表达于主动脉内皮组织，呈棕黄色颗粒。正常组有微量表达，模型组E-selectin的表达增强，降脂通络软胶囊组及辛伐他汀组E-selectin的表达均较少。 结论： 本实验成功复制SD大鼠食饵性高脂血症病变的模型，应用降脂通络软胶囊进行干预性治疗，综合分析实验结果，可以得出如下结论： 1 降低TC、TG、LDL-C和AI，升高HDL-C，改善食饵性高脂血症大鼠的脂代谢。 2 通过对主动脉形态学改变的观察，提示降脂通络软胶囊可能有保护和修复血管内皮，改善血管内皮细胞功能，防治高脂血症的作用，其作用机制可能与以下三种途径有关： 2．1升高SOD活性，降低MDA含量，抗脂质过氧化，减轻氧自由基的损伤，影响细胞激素分泌。 2．2增强前列环素活性，减少缩血管物质血栓素A<,2>的分泌，抗凝血、抗血小板聚集和防止血栓形成。 2．3下调血管壁内黏附分子E-selectin的表达，抗细胞粘附，抑制单核细胞的浸润和免疫粘附。

目录

摘要

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述：中西医结合治疗高脂血症的进展

致谢

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