第一章 绪论
1.1前言
1.2 生物合成异丁醇的研究进展
1.2.1 酿酒酵母合成异丁醇的研究进展
1.2.2 微生物异丁醇耐受性的研究
1.2.3 高密度发酵技术
1.3 本工作的研究思路
第二章 实验材料和方法
2.1 实验材料
2.1.1 引物，质粒及菌种
2.1.2 实验所用仪器
2.1.3 主要药品
2.1.4 溶液与培养基配制
2.2 实验方法
2.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备
2.2.2 大肠杆菌感受态细胞的转化
2.2.3 PCR扩增
2.2.4 酚氯仿纯化DNA
2.2.5 DNA的限制性内切酶消化
2.2.6 DNA连接反应
2.2.7 质粒的提取（CTAB法）
2.2.8 DNA的胶回收
2.2.9 琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段
2.2.10 酿酒酵母细胞的醋酸锂转化法
2.2.11 酵母染色体的分离
2.2.12 EMS诱变
2.2.13 稀释实验
2.3 发酵条件
2.4 发酵液样品的测定方法
2.4.1 测定酵母菌株的生长曲线
2.4.2 DNS法测定发酵液中葡萄糖含量
2.4.3 测定发酵液中异丁醇含量
2.4.4 测定发酵液中乙醇含量
第三章 EMS诱变高异丁醇耐受性酿酒酵母的筛选
3.1 菌液浓度与初始异丁醇耐受性的确定
3.2 EMS诱变条件的确定
3.3 高异丁醇耐受性菌株的筛选
3.4 突变菌株的生长特性
3.5 讨论
第四章 过量表达基因ILV2、ILV5、ILV3和ARO10载体的构建
4.1 质粒YEplac195-PGK1p-ILV2的构建
4.2 质粒YEplac112-PGK1p-ILV5-GFP-CYC1的构建
4.3 质粒pUC18-δ5'-His-PGK1p-ILV3-δ3'的构建
4.4 质粒YEplac181-TDH3p-Cox4-ARO10-GFP-CYC1的构建
4.5 讨论
第五章 工程菌EMS39 V2V3V5O10产异丁醇性能研究
5.1 工程菌EMS39 V2V3V5O10的构建
5.2 工程菌EMS39 V2V3V5O10发酵性能研究
5.3 工程菌EMS39 V2V3V5O10高密度发酵性能研究
5.4 讨论
第六章 异戊醇代谢途径关键酶表达载体构建
6.1 过表达MPC1和MPC3基因载体的构建
6.2 过表达LEU2，LEU1和LEU9基因载体的构建
第七章 结论与展望
7.1 结论
7.2 创新点与展望
参考文献
攻读学位期间所取得的相关科研成果
致谢
河北工业大学;
