1前言
1.1不育系的应用价值
1.2植物雄性不育的形成及特征特性
1.2.1雄性不育的形成
1.2.2雄性不育的特征特性
1.3不育性的遗传研究
1.4细胞核雄性不育基因研究
1.5不育系快速选育的方法和技术
1.6本研究的目的意义
2材料与方法
2.1实验材料及仪器设备
2.1.1序列来源
2.1.2植物材料
2.1.3菌株及载体
2.1.4主要试剂及引物
2.1.5培养基种类及配制
2.1.6主要仪器设备
2.2实验方法
2.2.1植物DNA的提取及检测
2.2.2总RNA提取及cDNA合成
2.2.3普通烟草Ntms1-1、Ntms1-2的PCR扩增及克隆
2.2.4 Ntms1生物信息学分析
2.2.5 sgRNA敲除靶点设计
2.2.6重组载体遗传转化
2.2.7 转化植株筛选鉴定
2.2.8阳性株突变效应检测
2.3技术路线
3结果与分析
3.1 Ntms1基因的扩增及克隆
3.2 烟草ms1基因生物信息学预测
3.2.1开放阅读框（ORF）分析
3.2.2理化性质分析
3.2.3蛋白比对
3.2.4 亲疏水性分析
3.2.5功能结构域分析
3.2.6二级结构及三级结构预测
3.2.7磷酸化位点分析
3.2.8信号肽及跨膜区分析
3.2.9系统进化树分析
3.3敲除靶点设计及载体信息
3.4重组载体遗传转化
3.5转化植株筛选鉴定
3.5.1DNA提取质量鉴定
3.5.2 Cas9基因筛选
3.5.3潮霉素抗性鉴定
3.5.4阳性植株测序
3.6阳性株突变效应分析
3.6.1突变株基因表达量分析
3.6.2花部形态观察
3.6.3 MDA含量检测
3.6.4花粉活力检测
3.6.5花粉萌发能力检测
4讨论
4.1 基因生物信息学分析与功能预测
4.2 CRISPR/Cas9技术在作物改良上的应用
4.3烟草不育材料的创制
5结论与展望
参考文献
致谢
附录
声明
贵州大学;
