海马电刺激对耐药性颞叶癫痫大鼠脑组织CREB及GABA(A)受体α1表达的影响

摘要

目的：　　建立杏仁核点燃耐药性颞叶癫痫大鼠模型，经过海马电刺激治疗后，检测GABA（A）受体亚单位α1、CREB、p-CREB、ICER及BDNF在大鼠海马组织中的表达变化，探究其在耐药性癫痫及海马电刺激中可能的机制。　　方法:　　选择成年雄性SD大鼠100只，其中10只正常大鼠作为正常对照组，另外90只用于制作慢性杏仁核点燃模型，模型制作成功后用苯妥英钠及苯巴比妥进行耐药性癫痫模型的筛选，以1小时后ADT值的变化为指标，筛选出药物敏感癫痫大鼠和耐药性癫痫大鼠，并将耐药性癫痫大鼠按照完全随机数字表法分为耐药对照组和海马刺激组，通过观察大鼠的行为学改变、脑电变化及病理学HE染色，以评价海马电刺激的治疗效果，治疗结束后取四组大鼠海马组织，行免疫组织化学染色方法和蛋白质免疫印迹法检测 GABA（A）受体亚单位α1、CREB、p-CREB、ICER及 BDNF的表达。　　结果：　　1、成功建立耐药性癫痫模型和海马刺激治疗模型，其脑电频率（正常组8.700±1.494 Hz，敏感组14.700±1.160 Hz，耐药组19.800±1.686 Hz，刺激组15.800±1.033 Hz）、发作时间（敏感组36.100±6.557 s，耐药组82.100±9.158 s，刺激组38.900±3.784 s）、ADT值（刺激前138.600±2.675 mA，刺激后226.800±4.638 mA）在组间的差异有统计学意义（P＜0.05），治疗过程未出现明显的并发症，海马电刺激治疗耐药性癫痫安全有效。　　2、经免疫组织化学染色方法检测，CREB、p-CREB、ICER及 BDNF的阳性细胞表达在耐药模型组（0.402±0.017，0.316±0.015，0.409±0.021，0.328±0.034）高于海马刺激组（0.257±0.026，0.259±0.013，0.266±0.027，0.232±0.015）及药物敏感组（0.244±0.039，0.249±0.022，0.281±0.029，0.249±0.018），均高于正常组（0.177±0.013，0.176±0.016，0.178±0.011，0.176±0.019），组间差异有统计学意义（P＜0.05）；GABAARα1的阳性细胞表达在正常组（0.332±0.036）、海马刺激组（0.229±0.014）及药物敏感组（0.235±0.015）均高于耐药模型组（0.147±0.011），组间差异有统计学意义（P＜0.05）。　　3、经蛋白质免疫印迹法检测，CREB、p-CREB、ICER及 BDNF的蛋白含量（IOD值）在耐药模型组（0.477±0.141，1.061±0.289，0.795±0.198，0.927±0.091）高于海马刺激组（0.298±0.047，0.648±0.258，0.525±0.062，0.545±0.071）及药物敏感组（0.361±0.151，0.602±0.130，0.508±0.066，0.556±0.058），均高于正常组（0.161±0.078，0.343±0.099，0.285±0.102，0.283±0.063），组间差异有统计学意义（P＜0.05）；GABA（A）受体亚单位α1的蛋白含量（IOD值）在正常组（1.850±0.334）、海马刺激组（1.067±0.124）及药物敏感组（1.066±0.103）均高于耐药模型组（0.720±0.230），组间差异有统计学意义（P＜0.05）；4、检测指标之间相关性分析，GABA（A）受体亚单位α1与CREB、p-CREB、ICER、BDNF呈显著负相关（P＜0.01）。　　结论：　　1、通过杏仁核电刺激慢点燃，并以苯妥英钠及苯巴比妥药物筛选后可成功建立理想的耐药性癫痫大鼠模型；　　2、海马电刺激治疗可以有效的抑制大鼠的发作级别及持续时间，降低脑电频率，验证海马电刺激治疗的有效性；　　3、GABA(A)Rα1表达在海马刺激组升高，CREB、p-CREB、ICER、BDNF的表达海马刺激组中降低，提示其可能参与了耐药性癫痫及海马电刺激机制；　　4、GABA(A)Rα1与CREB、p-CREB、ICER、BDNF呈显著负相关，提示CREB、p-CREB、ICER、BDNF可能影响GABA(A)Rα1的表达。

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英文缩略词表

0 引 言

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

2 结果

2.1 癫痫模型的建立及电刺激疗效判定

2.2 癫痫大鼠病理形态学特点

2.3 免疫组化结果

2.4 Western blot法检测结果

3 讨 论

3.1 耐药性癫痫模型的可靠性

3.2 海马电刺激治疗耐药性癫痫的疗效分析

3.3 GABA(A)Rα1、CREB、p-CREB、ICER及BDNF在耐药性癫痫及海马电刺激治疗后的表达

3.4 GABA(A)Rα1与CREB、p-CREB、ICER、BDNF的相关性

4 结 论

参考文献

综述：γ一氨基丁酸受体在癫痫中的研究进展

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致谢

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