声明
第一章 前言
1.1 甲基营养菌
1.1.1 甲基营养菌的定义
1.1.2 甲基营养菌的分类
1.1.3 甲基营养菌的应用
1.1.4 甲基营养菌的研究进展
1.1.5 甲基营养菌的主要代谢途径
1.2 丝氨酸
1.2.1 L-丝氨酸的理化性质
1.2.2 L-丝氨酸的应用
1.2.3 L-丝氨酸的生产方法
1.3 甘氨酸为前体物发酵生产L-丝氨酸
1.3.1 异养型菌株发酵生产L-丝氨酸
1.3.2 甲基营养型菌株发酵生产L-丝氨酸
1.4 甲醇
1.5 Mutl基因
1.6 MarR家族基因
1.7 选题的研究意义与目的
第二章 材料与方法
2.1 材料
2.1.1菌株、质粒及抗生素
2.1.2 培养基
2.1.3 菌株培养及保存
2.1.6 缓冲液及溶液
2.2 分子生物学操作
2.2.1 基因组DNA提取
2.2.2 质粒DNA的小量提取
2.2.3 琼脂糖凝胶电泳
2.2.4 聚合酶链式反应
2.2.5 感受态细胞的制作
2.2.6 DNA分子的酶切、纯化和连接
2.2.7 质粒的转化与验证
2.3 甲基营养菌MB200突变修复基因mutL遗传操作
2.3.1 MutL基因突变株MB200mTB的构建
2.3.2 菌株MB200mTB耐甲醇诱导驯化
2.3.3 互补菌株MB200mHB的构建
2.3.4 菌株MB200mHB的遗传稳定性
2.3.5 重组菌株生长情况分析
2.3.6 静息细胞反应体系
2.3.7 L-丝氨酸定性定量分析
2.4 甲基营养菌MB200转录调控基因trmf遗传操作
2.4.1 Trmf基因突变株MB200tTB的构建
2.4.2 互补菌株MB200tHB的构建
2.4.3 过表达菌株MB200trmf的构建
2.4.4 菌株生长情况分析
2.4.5 菌株发酵产L-丝氨酸情况分析
第三章 MB200中突变修复基因mutL的初步研究
3.1 突变修复基因mutL的克隆
3.1.1 M. sp MB200 mutL基因的克隆
3.1.2 扩增基因的验证
3.2 MutL基因突变株的构建
3.2.1 MutL基因的克隆
3.2.2 扩增基因的验证
3.2.3 重组质粒pK18mob-mutlps的构建
3.2.4 三亲本接合
3.2.5 突变菌株的验证
3.3 菌株MB200mTB耐甲醇诱导驯化
3.3.1 甲基营养菌M. sp. MB200耐受甲醇的情况分析
3.3.2 菌株MB200mTB耐甲醇诱导驯化
3.4 互补菌株MB200mHB的构建
3.4.1 质粒pCM80的提取
3.4.2 表达载体pCM80-mutL的构建
3.4.3 重组菌株MB200/pCM80-mutL的构建
3.5 菌株MB200mHB的遗传稳定性
3.6 重组菌株生长情况分析
3.6.1 菌株生长曲线的测定
3.6.2 利用不同氮源对菌株进行培养
3.7 菌株发酵产L-丝氨酸情况分析
3.7.1 DNS-氨基酸聚酰胺薄膜层析
3.7.2 高效液相色谱检测
3.8 本章小结
第四章 MB200中转录调控基因tmrf的初步研究
4.1 Trmf基因突变株MB200tTB的构建
4.1.1 MarR家族转录调控基因trmf和其片段trmfps的克隆
4.1.2 扩增基因的验证
4.2 Trmf基因突变株的构建
4.2.1 重组质粒pK18mob-trmfps的构建
4.2.2 三亲本接合
4.2.3 突变菌株的验证
4.3 互补菌株MB200tHB和过表达菌株MB200trmf的构建
4.3.1 表达载体pCM80-trmf的构建
4.3.2 互补菌株MB200tHB的构建与验证
4.3.3 过表达菌株MB200trmf的构建与验证
4.4 菌株在甘氨酸培养基中生长情况分析
4.5 发酵产L-丝氨酸情况分析
4.5.1 L-丝氨酸定性分析
4.5.1 L-丝氨酸定量分析
4.6 本章小结
第五章 总结与讨论
5.1 总结
5.2 讨论
5.3 展望
参考文献
附录
附录一：本实验所用菌株及质粒
附录二：Methylobacterium sp. MB200 mutl 的基因序列
附录三：Methylobacterium sp. MB200 trmf 的基因序列
致谢
攻读学位期间论文发表情况
广西大学;
