右美托咪定对人肝癌细胞HepG2生物学行为的影响

摘要

目的:本研究旨在观察不同浓度梯度的右美托咪定对肝癌HepG2细胞增殖、迁移、克隆、细胞周期和细胞凋亡等一系列生物学行为的影响，探讨右美托咪定在体外对肝癌细胞的作用，为临床使用右美托咪定提供一定的参考。　　方法:以人肝癌HepG2细胞为研究对象，分别接种于6孔、24孔或96孔培养板中，用不同浓度的右美托咪定分别处理人肝癌HepG2细胞，分为对照组（C组，只加入完全培养基）、右美托咪啶1ng/ml组（D1组）、右美托咪啶10ng/ml组（D2组）、右美托咪啶100ng/ml组（D3组）、右美托咪啶1000ng/ml组（D4组）共5组细胞，培养细胞24h、48h、72h或10天，药物由含10％的胎牛血清的DMEM完全培养基稀释配制而成，并使用缓冲液调整培养基的PH，每组实验均设置3个复孔作为平行组。用CCK-8法检测右美托咪定对HepG2细胞的增殖能力的影响，用Transwell法检测右美托咪定对HepG2细胞的迁移能力影响，用平板克隆形成实验检测右美托咪定对HepG2细胞克隆能力的影响，用流式细胞仪检测右美托咪定对HepG2的细胞周期和细胞凋亡的影响变化情况。　　结果:使用不同浓度的右美托咪定作用于HepG2细胞后，CCK-8检测结果显示C、D1、D2、D3、D4组的48h的波长为450nm的吸光度值(A450值)分别为(1.33±0.22)（1.95±0.11）(2.23±0.08)(1.5±0.13)(1.45±0.12);Transwell细胞迁移实验显示C、D1、D2、D3、D4组的细胞迁移数量分别为（1935.50±291.75）（3170.33±542.48）（4528.67±778.51）（2185.00±648.00)(2097.67±471.46);细胞克隆实验显示C、D1、D2、D3、D4组的细胞克隆后数量分别为（183.17±100.11）（657.17±218.47）（1088.33±230.54）（228.33±136.95）(238.33±105.36)，上述结果表明使用右美托咪定干预HepG2细胞后，在D1、D2组中细胞的增殖、迁移及克隆的能力均有所增强，表明右美托咪定在一定程度能促进肝癌HepG2细胞的生物学活性，而D3、D4组中细胞的增殖、迁移和细胞克隆数量与对照组相比无统计学差异。流式细胞仪检测细胞周期实验显示C、D1、D2、D3、D4组的细胞停留在G1期的细胞百分比分别为（44.06±1.46）（40.58±1.61）(36.79±1.18)（43.79±1.42）（44.76±1.39），停留在S期的细胞百分比分别为（8.29±0.48）（9.54±0.52）（11.81±1.02）（8.48±0.45）（8.46±0.57），停留在G2期的细胞百分比分别为(47.64±1.70)(49.88±1.78)(51.39±1.81)（47.73±1.06）（46.78±1.57），上述实验结果表明，D1、D2组中的细胞停留在G1期的细胞数量减少，而停留在S期和G2期的细胞数量增多，表明细胞的增生更为活跃，细胞生长更为旺盛，而D3、D4组中的细胞与对照组相比细胞周期的变化无明显差异。流式细胞仪检测细胞凋亡情况实验显示C、D1、D2、D3、D4组的细胞凋亡率分别为(14.01±2.18)（9.22±2.13）（8.13±2.78）（14.26±1.97）（14.77±1.81），上述实验结果表明，D1、D2组中的细胞凋亡率与其他组相比明显下降，细胞存活率更高，而D3、D4组中的细胞凋亡率与对照组无明显差异。　　结论:右美托咪定在低浓度时能促进体外人肝癌HepG2细胞的增殖、克隆和迁移能力，通过流式细胞仪结果显示，右美托咪定能促进细胞更快走向成熟，并减少细胞的凋亡率，并在低浓度时呈现一定的浓度依赖性。但高浓度的右美托咪定对肝癌HepG2细胞的一系列生物学影响与对照组相比无统计学意义，说明右美托咪定对肝癌细胞的生物学活性的作用有一定的浓度选择性。

目录

声明

个人简历

主要英文及缩略词表

摘要

前言

一、实验材料

1细胞

2主要的实验药品和试剂

3主要仪器及实验耗材

4主要试剂的配制

二、实验方法

1细胞培养的相关方法

2实验分组

3用CCK-8法检测细胞的增殖情况

4 Transwell法检测HepG2细胞的迁移能力

5平板克隆形成实验检测HepG2细胞克隆能力

6流式细胞仪分析法检测HepG2细胞周期情况

7流式细胞分析法检测HepG2细胞凋亡情况

8统计学方法

三、实验结果

1使用不同浓度的右美托咪定对肝癌HepG2细胞增殖的影响

2使用不同浓度的右美托咪定对肝癌HepG2对细胞迁移能力的影晌

3使用不同浓度的右美托咪定作用于肝癌HepG2对细胞克隆能力影响的结果

4使用不同浓度的右美托咪定作用于肝癌HepG2对细胞周期影响的结果

5使用不同浓度的右美托咪定作用于肝癌HepG2对细胞凋亡率影响的结果

四、讨论

五、结论

参考文献

综述 右美托眯定在癌症中的相关研究进展

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文