清热化瘀Ⅱ号方对大鼠脑缺血再灌注损伤Il-6及Il-8表达的影响

摘要

目的:观察清热化瘀Ⅱ号方(QRHYⅡ)对大鼠脑缺血再灌注损伤(I/R)缺血侧皮层IL-6、IL-8表达的影响，探讨QRHYⅡ号方对大鼠脑缺血再灌注损伤神经元保护的作用机制。　　方法:将成年健康SD大鼠192只（雌雄各半），按随机数字表分为两大组，每组96只，继续随机分为4个亚组:空白组（6只）、假手术组(30只)、模型对照组（30只）、QRHYⅡ组（30只）。假手术组、模型对照组及QRHYⅡ组均按缺血再灌注(I/R)2h后3h、6h、12h、24h、48h五个处死时间点分为5个亚组(n=6)，并分别作如下处理:空白组自由饮食，正常饲养;假手术组线栓只插入颈内动脉9mm，术后正常饲养，予生理盐水灌胃;模型对照组生理盐水灌胃7d后，线栓插入颈内动脉18-20mm，术后正常饲养，继续予生理盐水灌胃;QRHYⅡ组予QRHYⅡ号方灌胃7d，术后继续灌胃给药，余处理同模型对照组。参考Longa的5分制法对大鼠进行神经功能缺损评分，并按各时间点进行标本采集。取材后，一组行常规HE染色并在光镜下观察各组脑组织病理形态学改变，另一组应用放射免疫法(RIA)检测大鼠缺血侧皮层中IL-6、IL-8的表达。　　结果:1.HE染色结果:在光镜下，空白组及假手术组均未见神经元损伤，模型对照组及QRHYⅡ组有不同程度的神经元损伤，QRHYⅡ组在各时间点的神经元受损较模型对照组明显减少;2.放射免疫法(RIA)结果:各组大鼠皮层IL-6、IL-8与空白组差异有统计学意义（P＜0.05），说明本实验造模成功。(1)与假手术组相比，模型对照组与QRHYⅡ组IL-6在3h开始就有明显升高，并且在24h达到高峰，48h后仍维持在较高水平，差异有统计学意义(P＜0.05);与模型对照组相比，QRHYⅡ组随着存活时间的延续，IL-6的表达在同一时间点明显下降，具有极显著性的差异(P＜0.01)。(2)与假手术组相比，模型对照组与QRHYⅡ组在脑缺血再灌注后3h开始，IL-8的表达明显上调，并在24h到达高峰，且维持在较高水平，48h后逐渐下降，差异有统计学意义(P＜0.05);与模型对照组相比，QRHYⅡ组随着存活时间的延续，IL-8的表达活性在同一时间点均明显下降，具有极显著性的差异(P＜0.01)。　　结论:清热化瘀Ⅱ号方可能通过下调炎性因子IL-6、IL-8的释放，抑制TLRs/NF-κB信号通路的传导，减轻炎症级联反应，减轻脑缺血再灌注损伤，对大鼠脑缺血再灌注损伤发挥神经元保护作用。

目录

声明

摘要

引言

1 实验材料

1．1 实验动物

1．2 实验药物

1．3 主要试剂及试剂配置

1．3．1 主要试剂

1．3．2 主要试剂的配置

1．4 主要仪器设备

2 实验方法

2．1 动物分组及给药

2．2 模型制备

2．3 模型剔除标准

2．4 观察指标及检测方法

2．4．1 HE染色观察脑组织形态学变化

2．4．2 放射免疫法(RIA)检测IL-6、IL-8

2．5 统计学方法

3 实验结果

3．1 动物造模结果

3．2 神经功能缺损评分

3．3 HE染色结果

3．4 放射免疫法(RIA)检测IL-6、IL-8的表达

3．4．1 脑缺血再灌注损伤对缺血侧皮层IL-6表达的影响

3．4．2 脑缺血再灌注损伤对大鼠缺血侧皮层IL-8表达的影响

4 讨论

4．1 脑缺血动物模型的选择

4．2 造模评价染色组织学方法选择

4．3 中医对缺血性中风的认识

4．3．1 古代医家对中风病的认识

4．3．2 现代医学对缺血性中风病因病机的研究

4．4 现代医学对脑缺血再灌注损伤的认识

4．4．1 毒损脑络与脑缺血再灌注损伤

4．4．2 TLRs跨膜信号传递与脑缺血再灌注损伤

4．4．3 NF-κB信号通路与脑缺血再灌注损伤

4．5 IL-6、IL-8在缺血性中风过程中的作用

4．5．1 IL-6在缺血性中风过程中的作用

4．5．2 IL-8对缺血性中风的作用

4．6 清热化瘀Ⅱ号方对缺血→炎症→血栓→再缺血恶性循环的阻断

4．7 清热化瘀Ⅱ号方对脑缺血再灌注IL-6、IL-8表达的影响

5 存在的问题和展望

结论

参考文献

附录

缩略词表

综述 基于“瘀毒伤髓”理论浅谈缺血性中风防治策略

致谢

个人简历及攻读学位期间获得的科研成果