广西特色民族药材白背叶黄酮类化学成分及质量分析研究

摘要

目的:利用现代分离、分析技术对广西民族特色药材“白背叶”所含黄酮类成分进行较系统的物质基础研究，并对黄酮类成分的提取、纯化工艺进行了研究;在此基础上以整体成分、多成分控制为切入点对其质量控制方法进行提高与完善，所建立的方法能更好地控制白背叶的质量，为充分开发、利用广西白背叶资源提供了科学的依据。　　方法:化学成分研究方面:采用系统溶剂提取、柱层析和高效液相色谱法等现代分离技术对“白背叶”乙酸乙酯提取部位进行分离纯化，利用现代光谱、波谱技术对分离得到得到的化合物进行结构鉴定;黄酮类成分提取物方面:采用柱层析技术对白背叶所含黄酮碳苷类成分的提取、纯化工艺进行研究，优化了提取、纯化的工艺参数;质量分析方面:利用高效液相色谱法(HPLC)，以Agilent C18(4.6×250mm，5μm)为色谱柱，甲醇-0.1％冰乙酸为流动相，梯度洗脱，流速为1ml/min，检测波长为336nm，以分离、纯化得到的夏佛托苷等3个黄酮碳苷类成分为控制指标，建立了多成分控制“白背叶”质量的含量测定方法，同时采用TLC法鉴别白背叶和HPLC法建立白背叶药材的指纹图谱进行了研究。　　结果:化学成分研究方面:从白背叶乙酸乙酯提取部位分离得到了5个化合物，并鉴定了其化学结构，分别是葫芦巴苷Ⅱ、异夏佛托苷、夏佛托苷、大波斯菊苷，洋芹素，其中异夏佛托苷、夏佛托苷为首次从白背叶中分离得到;黄酮类成分提取物方面:以葫芦巴苷Ⅱ、异夏佛托苷、夏佛托苷、大波斯菊苷的含量为指标，通过对提取溶剂、提取方法、柱色谱吸附剂、洗脱溶剂等参数进行提取纯化工艺进行优化，最终确定:以50％乙醇为提取溶剂，大孔D101树脂为吸附剂，先以10％乙醇溶液洗脱去除杂质，继用40％乙醇洗脱，收集40％乙醇洗脱液减压蒸干，该提取工艺得到的背叶黄酮碳苷类提取物的纯度为70.99％;质量分析方面:在所建立液相色谱条件下芦巴苷Ⅱ、异夏佛托苷、夏佛托苷3个成分均达到基线分离，其分别在0.0266～5.320、0.0244～4.880、0.0242～4.840μg范围内线性关系良好(r=0.9990)，平均加样回收率(n=6)分别为97.26％、100.09％、103.02％。所建立的液相色谱条件可同时作为白背叶黄酮类成分指纹图谱的色谱条件，利用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》计算机软件（A版）对10批不同来源的白背叶药材的质量相关性进行了初步研究，结果表明不同来源白背叶所含的黄酮类成分基本相同，但是不同产地白背叶黄酮类成分含量差异较大。　　结论:利用现代分离、分析技术对“白背叶”药材所含黄酮类成分进行了较为系统的研究，分离鉴定了5个化合物，其中异夏佛托苷和夏佛托苷为首次从白背叶中分离得到;对白背叶黄酮类成分提取物的提取、纯化工艺进行了研究，优化、确定了最佳的工艺条件，所得到的提取物的纯度为70.99％;在此基础上，采用多指标含量测定与整体黄酮类成分HPLC指纹图谱、TLC薄层鉴别相结合的方法对白背叶的质量控制方法进行提高和完善，可更好地控制白背叶内在质量，为进一步开发、利用白背叶药材资源及其黄酮类成分提取物提供了科学依据。

目录

声明

摘要

引言

第一部分 白背叶黄酮成分的研究

1．1 药材、实验仪器与试剂

1．1．1 药材

1．1．2 实验仪器

1．1．3 试剂

1．2 白背叶黄酮类化学成分预实验

1．2．1 供试品溶液的制备

1．2．2 化学成分预实验

1．2．3 小结

1．3 白背叶化学成分的提取和分离与纯化

1．3．1 提取、分离与纯化过程

1．3．2 白背叶提取和分离总流程图

1．4 单体化合物的结构鉴定

1．4．1 化合物Ⅰ结构鉴定

1．4．2 化合物Ⅱ结构鉴定和图谱解析

1．4．3 化合物Ⅲ的结构鉴定

1．4．4 化合物Ⅳ的结构鉴定

1．4．5 化合物Ⅴ的结构鉴定

第二部分 白背叶中黄酮成分的提取纯化工艺

2．1．1 实验材料、仪器与试药

2．1．1．1 试验材料

2．1．1．2 仪器

2．1．1．3 试药

2．1．2 对照品溶液的制备

2．1．3 单因素实验

2．1．3．1 提取方法的考察

2．1．3．2 提取溶剂的考察

2．1．3．3 提取时间的考察

2．1．3．4 提取料液比的考察

2．1．3．5 提取次数的考察

2．1．4 正交实验

2．1．5 正交试验结果

2．2 有效成分的纯化

2．2．1 上样液的制备

2．2．2 纯化条件的考察

2．2．3 最佳工艺的确定

2．2．4 讨论

第三部分 白背叶薄层色谱鉴别的研究

3．1 实验材料、仪器与试药

3．1．1 实验材料

3．1．2 仪器

3．1．3 试药

3．2 对照品溶液的制备

3．3 供试品的制备

3．4 薄层板的选择

3．5 展开剂的选择

3．6 薄层色谱鉴别

3．7 讨论

3．7．1 提取方法的选择

3．7．2 展开系统条件的选择

3．7．3 薄层鉴别对照的选择

第四部分 白背叶中黄酮成分的含量测定

4．1 实验药材、仪器与试药

4．1．1 实验药材

4．1．2 仪器

4．1．3 试药

4．2 色谱条件的选择

4．2．1 检测波长的选择

4．2．2 流动相条件选择

4．2．3 流速的选择

4．2．4 洗脱程序的选择

4．2．5 色谱条件的确定

4．3 标准曲线的绘制

4．4 样品的制备和含量测定

4．5 单因素实验

4．5．1 提取方法的考察

4．5．2 提取溶剂的考察

4．5．3 溶剂浓度的考察

4．5．4 提取时间的考察

4．5．5 提取料液比考察

4．5．6 最终提取条件的确定

4．6 对照品和样品的色谱图

4．7 方法学的考察

4．7．1 精密度试验

4．7．2 稳定性试验

4．7．3 重复性试验

4．7．4 加样回收试验

4．8 样品测定

4．9 讨论

第五部分 白背叶指纹图谱研究

5．1 实验仪器、材料与试剂

5．1．1 实验仪器

5．1．2 实验材料

5．1．3 实验试剂

5．2 色谱条件的选择

5．2．1 流动相系统的选择

5．2．2 洗脱程序的选择

5．2．3 检测波长的选择

5．2．4 柱温及流速的选择

5．2．5 确定指纹图谱色谱条件

5．3 单因素实验

5．3．1 样品制备方法的确定

5．3．2 提取方法的选择

5．3．3 提取方法的确定

5．3．4 对照品溶液的配制

5．4 方法学考察

5．4．1 精密度实验

5．4．2 重复性实验

5．4．3 稳定性实验

5．5 参照色谱峰的建立

5．6 各产地药材的指纹图谱采集

5．7 指纹图谱与共有峰的确定

5．8 药材相似度评价

5．9 小结

结论

参考文献

综述 白背叶化学成分和药理作用研究进展

致谢

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