孕激素及孕激素核、膜受体表达对SLE外周血单个核细胞相关因子表达的影响

摘要

目的:系统性红斑狼疮(SLE)是一种慢性、复杂的自身免疫性疾病，累及多系统器官，对人类的危害较大。SLE的发病机理尚不明确，但SLE与性激素有关，女性发病率远远高于男性。近年来，大量研究资料表明孕激素是一种免疫调节分子，具有免疫调节功能，可抑制Th1细胞反应，诱导Th2细胞反应及促进不对称抗体的产生。本课题通过对SLE患者血浆雌孕激素水平、外周血单个核细胞(PBMCs)孕激素核/膜受体表达情况的检测，并依据此两种受体的不同表达结果对SLE PBMCs进行分组，以不同浓度孕激素对各组进行干预，并检测其相关细胞因子表达情况等一系列实验，最终旨在阐述孕激素在系统性红斑狼疮发病中的调节作用。　　方法:收集48例女性SLE患者和26例健康女性肝素抗凝的空腹静脉血，并根据SLE疾病活动性指标(SLEDAI-2000)对48例SLE患者进行临床分期。Ficoll密度梯度离心法分离血浆及PBMCs，免疫组化法及直接免疫荧光法检测SLE患者及26例健康女性PBMCs孕激素核受体(nPR)及孕激素膜受体(mPR)的表达;化学发光免疫法检测SLE患者及健康女性血浆雌、孕激素水平;体外培养SLE患者nPR和/或mPR表达阳性的PBMCs，以不同浓度孕激素(1×10-8mol/L、1×10-7mol/L、1×10-6mol/L)进行诱导并培养，ELISA法检测培养液IL-2、IFN-γ、IL-10因子的表达。利用统计学分析SLEDAI临床与实验室各指标的相关性。　　结果:　　1.SLE患者及健康女性血浆雌孕激素水平 SLE疾病活动期血浆孕酮较健康女性低(P＜0.05)，SLE疾病活动期雌二醇较稳定期及健康女性高（P＜0.05）。　　2.PBMCs中PR的表达情况48例SLE病例中nPR+或/和mPR+为34/48(70.83％)，高于26例女性健康组11/26(42.31％)，P＜0.05;SLE活动期组nPR+或/和mPR+为18/20(90.00％)高于女性健康组，P＜0.05; SLE活动期亦高于稳定期16/28(57.14％)，P＜0.05。　　3.不同浓度Pg对体外培养的PBMCs IL-10、IL-2、IFN-γ表达的影响孕激素浓度≥1×10-7mol/L时，上调nPR+PBMCs的IL-10因子表达(P＜0.05)，下调IFN-γ因子表达(P＜0.05)，且下调nPR+mPR+BPBMCs的IFN-γ因子表达(P＜0.05);孕激素浓度为1×10-6mol/L时，上调mPR+PBMCs的IL-10因子表达(P＜0.05)，而下调nPR+PBMCs的IL-2因子表达（P＜0.05）。其余组与相应对照组均无显著差异。　　结论:　　1.SLE患者血浆存在雌、孕激素水平失衡，疾病活动期血清雌激素水平增加，而孕激素水平下降，提示SLE疾病活动性与雌孕激素异常有关。　　2.SLE患者外周血单个核细胞孕激素核、膜受体表达增强，总表达率高于健康女性，疾病活动期表达亦高于稳定期。提示孕激素核及膜受体在SLE发病机制中具有一定的意义，且可作为判断SLE疾病活动性的指标。　　3.高浓度孕激素可通过受体依赖机制上调PBMCs IL-10表达，下调IL-2、IFN-γ表达，提示孕激素通过与孕激素核及膜受体结合诱导相关免疫细胞因子的表达变化而参与SLE发病，为进一步明确SLE发病机制提供了依据。

目录

声明

摘要

引言

1 实验材料

1．1 研究对象

1．2 主要试剂

1．3 试验器具与耗材

1．4 主要仪器设备

1．5 主要试剂的配置

2 实验方法

2．1 实验器具的准备与处理

2．2 外周血单个核细胞(PBMCs)的分离

2．3 细胞免疫组化法检测孕激素核受体表达

2．4 直接免疫荧光法检测孕激素膜受体表达

2．5 PBMCs培养

2．6 ELISA法检测培养细胞因子表达

2．7 化学发光免疫法检测血浆孕酮、雌二醇水平

2．8 统计学分析

3 实验结果

3．1 PBMCs中PR的表达情况

3．2 血浆孕酮及雌二醇水平

3．3 不同浓度Pg对体外培养的PBMCs细胞因子的影响

4 讨论

结论

参考文献

附录

综述 孕激素在自身免疫疾病中的免疫调节作用

致谢

个人简历及攻读学位期间获得的科研成果