壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠肝星状细胞PI3K/Akt信号传导途径的影响

摘要

目的:本课题将研究壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠肝星状细胞PI3K/Akt信号传导途径的影响,以进一步阐释壮肝逐瘀煎抗肝纤维化的作用机理。　　方法:健康清洁级SD大鼠102只,雌雄各半,体重220~250克,随机取14只作为正常对照组(A组)。剩余大鼠进行肝纤维化造模,于第4W末A组及造模大鼠各随机处死4只,做病理检测证实肝纤维化形成。其余造模大鼠随机分为病理模型组(B组)、壮肝逐瘀煎大剂量(成人40倍量)、中剂量(成人20倍量)、小剂量(成人10倍量)治疗组(C、D、E组)、大黄蟅虫丸对照组(F组)、秋水仙碱对照组(G组)共六个组,每组14只。采用CCL4复合因素大鼠肝纤维化模型造模方法。造模4周后各组分别予以灌胃给药(C、D、E、F、G组)、生理盐水(A、B组),灌胃液体量为1ml/100g体重,1次/天,药物浓度及等效剂量按体表面积折算。A、B、C、D、E、F、G各组于用药治疗后6W末,禁食12小时,每组取10只大鼠,经10％水合氯醛麻醉,股静脉采血后处死,剖取肝脏,取肝脏右叶相同部位组织2块,一块置入10％甲醛,作常规石醋切片,另一块于液氮中保存以备提取 mRNA。肉眼观察肝组织大体形态变化;采用免疫组织化学染色图像分析方法,检测大鼠肝组织 PI3K、Akt蛋白水平的改变;采用 real-time PCR方法,检测肝组织 PI3K、Akt、PDK1基因的表达情况;体外贴壁培养HSC-T6细胞,流式细胞术检测HSC-T6细胞的凋亡率。　　结果:(1)大鼠一般情况观察显示:壮肝逐瘀煎可明显改善HF大鼠的精神状态、饮食、皮毛色泽,增加其体重。(2)肝组织大体形态变化:壮肝逐瘀煎高、中剂量组及秋水仙碱组肝脏大体形态较模型对照组改善较为明显。(3)免疫组化染色:壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠肝组织 PI3K、Akt蛋白表达的影响:与病理模型组相比,壮肝逐瘀煎治疗组、大黄蛰虫丸组及秋水仙碱组肝组织PI3K及Akt蛋白阳性面积比明显降低(P<0.01或P<0.05);与大黄蟅虫丸组相比,壮肝逐瘀煎大、中剂量组明显优于大黄蟅虫丸组(P<0.05),壮肝逐瘀煎小剂量组与大黄蟅虫丸组相比无统计学意义(P>0.05);与秋水仙碱组相比,壮肝逐瘀煎大剂量组明显优于秋水仙碱组(P<0.05),壮肝逐瘀煎中、小剂量组与秋水仙碱组相比无统计学意义(P>0.05)。(4)实时荧光PCR检测:①壮肝逐瘀煎对HF大鼠PI3K基因表达的影响:与病理模型组比较,壮肝逐瘀煎大、中治疗组及大黄蟅虫丸组PI3KmRNA的表达均显著降低(P<0.01或P<0.05);与大黄蟅虫丸组比较,壮肝逐瘀煎大剂量组明显优于大黄蟅虫丸组( P<0.05),壮肝逐瘀煎中、小剂量组与大黄蟅虫丸组相比无统计学意义(P>0.05);与秋水仙碱组比较,壮肝逐瘀煎大、中剂量组明显优于秋水仙碱组(P<0.05),壮肝逐瘀煎小剂量组与秋水仙碱组相比无统计学意义(P>0.05)。②壮肝逐瘀煎对HF大鼠Akt基因表达的影响:与病理模型组比较,壮肝逐瘀煎治疗组及秋水仙碱组 AktmRNA的表达均显著降低(P<0.01或 P<0.05);与大黄蟅虫丸组比较,壮肝逐瘀煎大、中剂量组明显优于大黄蟅虫丸组( P<0.05),壮肝逐瘀煎小剂量组与大黄蟅虫丸组相比无统计学意义(P>0.05);与秋水仙碱组比较,壮肝逐瘀煎大、中剂量组明显优于秋水仙碱组(P<0.05),壮肝逐瘀煎小剂量组与秋水仙碱组相比无统计学意义(P>0.05)。③壮肝逐瘀煎对HF大鼠PDK1基因表达的影响:与病理模型组比较,壮肝逐瘀煎治疗组PDK1mRNA的表达均显著降低(P<0.01或P<0.05);与大黄蟅虫丸组比较,壮肝逐瘀煎大、中剂量组明显优于大黄蟅虫丸组(P<0.05),壮肝逐瘀煎小剂量组与大黄蟅虫丸组相比无统计学意义(P>0.05);与秋水仙碱组比较,壮肝逐瘀煎大、中剂量组明显优于秋水仙碱组(P<0.05),壮肝逐瘀煎小剂量组与秋水仙碱组相比无统计学意义(P>0.05)。(5)流式细胞术检测:与正常组相比,壮肝逐瘀煎治疗组、大黄蟅虫丸组及秋水仙碱组对HSC细胞的凋亡率均明显提升(P<0.01);与大黄蟅虫丸组比较,壮肝逐瘀煎小、中、大剂量组明显优于大黄蟅虫丸组(P<0.05);与秋水仙碱组比较,壮肝逐瘀煎小、中、大剂量组明显优于秋水仙碱组(P<0.05)。(6)壮肝逐瘀煎的药效具有一定的剂量依赖关系:大、中剂量组疗效优于小剂量组,大剂量组略优于中剂量组。　　结论:壮肝逐瘀煎主要是通过抑制 PI3K、Akt、PDK1的表达,对大鼠肝星状细胞 PI3K/AKT信号传导通路的激活进行调控,从而起到抗肝纤维化的作用。

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引言

正文

第一章 文 献 研 究

第一节 现代医学对HF的认识

1 HF的病因

2 HF的发生机制

3西医西药对HF的治疗

4 PI3K/AKT信号通路与肝纤维化

第二节中医学对HF的认识