癌痛消颗粒体外抑瘤作用的实验研究

摘要

目的:癌痛消颗粒是导师韦艾凌教授长期治疗肝癌的专病特色方。前期临床与实验研究显示其有抗原发性肝癌的作用。本实验研究以人肝癌细胞SMMC-7721、Bel-7404瘤株为研究对象，采用含药血清药理法、流式细胞术等现代科学实验研究手段，分析癌痛消颗粒在体外对肝癌细胞的抑制作用，从细胞周期调控和增殖与凋亡方面探讨其体外抗肿瘤的作用机制。　　 方法:1、体外直接抑瘤法，癌痛消颗粒作用于人肝癌SMMC-7721细胞、人肝癌细胞Bel-7404细胞:(1)MTT法检测癌痛消颗粒及氟尿嘧啶对人肝癌细胞SMMC-7721、Bel-7404的影响。(2)流式细胞术测定药物作用过后的细胞周期。2、采用血清药理学法制备空白血清、癌痛消颗粒含药血清、CTX含药血清，作用于人肝癌细胞SMMC-7721、Bel-7404:(1)MTT法检测癌痛消颗粒含药血清及CTX含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞、人肝癌细胞Bel-7404细胞的影响。(2)流式细胞术检测含药血清作用过后细胞的凋亡率。　　 结果:直接抑瘤法:作用于人肝癌细胞Bel-7404时:①5-Fu组与空白组比较差异有非常显著性意义(P＜0.01)，说明5-Fu在对人肝癌细胞Bel-7404作用48h后具有抑制增殖的作用;②癌痛消颗粒的低剂量组(5mg/mL)与空白组比较差异无显著性意义(P＞0.05);中低、中、中高、高剂量组(25mg/mL，50mg/mL，75mg/mL，100mg/mL)与空白组比较差异有非常显著性意义(P均＜0.01)，显示中低、中、中高、高剂量组癌痛消颗粒在对人肝癌细胞Bel-7404作用48h后具有抑制增殖的作用。③癌痛消颗粒各剂量组间比较差异均有显著性意义(P均＜0.05)，呈现浓度越高作用效果更好的量效关系。作用于人肝癌细胞SMMC-7721时:①5-Fu组与空白组比较差异有非常显著性意义(P＜0.01)，显示5-Fu在对人肝癌细胞SMMC-7721作用48h后具有抑制增殖的作用;②癌痛消颗粒的低剂量组(5mg/mL)与空白组比较差异无显著性意义(P＞0.05);中低、中、中高、高剂量组(25mg/mL，50mg/mL，75mg/mL，100mg/mL)与空白组比较差异有非常显著性意义(P均＜0.01)，显示中低、中、中高、高剂量组癌痛消颗粒在对人肝癌细胞SMMC-7721作用48h后具有抑制增殖的作用;③癌痛消颗粒各剂量组间比较差异均有显著性意义(P均＜0.05)，呈现浓度越高作用效果更好的量效关系。④癌痛消颗粒高浓度(100mg/mL)与5-Fu组比较差异无显著性意义(P＞0.05)，显示癌痛消颗粒高浓度(100mg/mL)与5-Fu人肝癌细胞SMMC-7721的抑制增殖作用相似。　　 细胞周期调控:癌痛消5个剂量组均可以引起人肝癌细胞SMMC-7721及Bel7404G0-G1期比例增加，癌痛消中低、中、中高、高剂量组(25mg/mL，50mg/mL，75mg/mL，100mg/mL)与空白对照组相比差异均有非常显著性意义(P均＜0.01)，癌痛消低剂量组(5mg/ml)与空白对照组相比差异有显著性意义(P＜0.05)，癌痛消颗粒各剂量组间比较差异均有显著性意义(P均＜0.05)，呈现浓度越高作用效果更好的量效关系(P均＜0.05)。　　 含药血清法:含药血清作用于人肝癌细胞Bel-7404时，①癌痛消低剂量组中含药血清浓度为10％、20％时与空白组比较差异均无显著性意义(P均＞0.05);显示癌痛消癌痛消低剂量组中含药血清浓度为10％、20％时对人肝癌细胞Bel-7404无抑制增殖作用。②随着含药血清浓度增加，癌癌痛消低剂量组中含药血清浓度为30％、40％、50％时与空白组比较差异均有显著性意义(P均＜0.05)，癌痛消颗粒中剂量组中含药血清浓度为10％、20％、30％、40％、50％、癌痛消颗粒高剂量组中含药血清浓度为10％、20％、30％、40％、50％与空白组比较差异均有显著性意义(P均＜0.05)，显示癌癌痛消颗粒低剂量组中含药血清浓度为30％、40％、50％、癌痛消颗粒中剂量组中含药血清浓度为10％、20％、30％、40％、50％、癌痛消颗粒高剂量组中含药血清浓度为10％、20％、30％、40％、50％对人肝癌细胞Bel-7404有抑制增殖作用。③CTX组与空白组比较差异有非常显著性意义(P＜0.01)。显示CTX组对人肝癌细胞Bel-7404有抑制增殖作用。癌痛消颗粒中剂量组中含药血清浓度为40％、50％、癌痛消颗粒高剂量组中含药血清浓度为40％、50％与CTX含药血清组比较差异无显著性意义(P均＞0.05)。显示癌痛消颗粒中剂量组中含药血清浓度为40％、50％、癌痛消颗粒高剂量组中含药血清浓度为40％、50％与CTX含药血清组对人肝癌细胞Bel-7404的抑制增殖作用相似。癌痛消颗粒含药血清作用于人肝癌细胞SMMC-7721时，①癌痛消低剂量组中含药血清浓度为10％时与空白组比较差异无显著性意义(P＞0.05);显示癌痛消癌痛消低剂量组中含药血清浓度为10％时对人肝癌细胞Bel-7404无抑制增殖作用。②随着含药血清浓度增加，癌癌痛消低剂量组中含药血清浓度为20％、30％、40％、50％时与空白组比较差异均有显著性意义(P均＜0.05)，癌痛消颗粒中剂量组中含药血清浓度为10％、20％、30％、40％、50％、癌痛消颗粒高剂量组中含药血清浓度为10％、20％、30％、40％、50％与空白组比较差异均有显著性意义(P均＜0.05)。显示癌癌痛消低剂量组中含药血清浓度为20％、30％、40％、50％、癌痛消颗粒中剂量组中含药血清浓度为10％、20％、30％、40％、50％、癌痛消颗粒高剂量组中含药血清浓度为10％、20％、30％、40％、50％对人肝癌细胞SMMC-7721有抑制增殖作用。③CTX含药血清组与空白组比较差异有非常显著性意义(P＜0.01)，显示CTX含药血清组对人肝癌细胞SMMC-7721有抑制增殖作用。癌痛消颗粒中剂量组中含药血清浓度为50％、癌痛消颗粒高剂量组中含药血清浓度为50％与CTX含药血清组比较差异无显著性意义(P均＞0.05)。显示癌痛消颗粒中剂量组中含药血清浓度为50％、癌痛消颗粒高剂量组中含药血清浓度为50％与CTX含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制增殖作用相似。　　 细胞凋亡率检测:癌痛消颗粒含药血清作用于人肝癌细胞Bel-7404时，癌痛消低剂量组中含药血清浓度为10％、20％时、癌痛消中剂量组中合药血清浓度为10％时、癌痛消高剂量组中含药血清浓度为10％时，与空白组比较差异均无显著性意义(P均＞0.05)，显示癌痛消低剂量组中含药血清浓度为10％、20％时、癌痛消中剂量组中含药血清浓度为10％时、癌痛消高剂量组中含药血清浓度为10％时没有促进人肝癌细胞Bel-7404凋亡的作用;随着含药血清浓度增加，癌痛消低剂量组中含药血清浓度为30％、40％、50％、中剂量组中含药血清浓度为20％、30％、40％、50％、高剂量组中含药血清浓度为20％、30％、40％、50％与空白组比较差异均有显著性意义(P均＜0.05)，显示癌痛消低剂量组中含药血清浓度为30％、40％、50％、中剂量组中含药血清浓度为20％、30％、40％、50％、高剂量组中含药血清浓度为20％、30％、40％、50％有促进人肝癌细胞Bel-7404凋亡的作用。癌痛消颗粒含药血清作用于人肝癌细胞SMMC-7721时，癌痛消低剂量组中含药血清浓度为10％、20％时与空白组比较比较差异均无显著性意义(P＞0.05)，显示癌痛消低剂量组中含药血清浓度为10％、20％时对人肝癌细胞SMMC-7721没有促进人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的作用;随着含药血清浓度增加，癌痛消低剂量组中含药血清浓度为30％、40％、50％、中剂量组中含药血清浓度为10％、20％、30％、40％、50％、高剂量组中含药血清浓度为10％、20％、30％、40％、50％与空白组比较差异均有显著性意义(P均＜0.05)，显示癌痛消颗粒低剂量组中含药血清浓度为30％、40％、50％、中剂量组中含药血清浓度为10％、20％、30％、40％、50％、高剂量组中含药血清浓度为10％、20％、30％、40％、50％时有促进人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的作用。　　 结论:癌痛消颗粒在体外对肝癌细胞有抑制增殖作用，其作用机理与细胞周期调控机制、增殖与促凋亡作用密切相关。

目录

中英文缩略词汇表

摘要

引言

1 癌痛消颗粒体外抑瘤实验的设计和观察指标

1．1 拟解决的关键问题

1．2 实验材料和方法

2 癌痛消直接体外抑瘤实验

2．1 MTT法测定OD值

2．2 PI单染法测定细胞周期

3 癌痛消颗粒含药血清法抑瘤实验

3．1 MTT法检测OD值及抑制率

3．2 细胞凋亡率检测

4 讨论

4．1 中医药对原发性肝癌的认识

4．2 癌痛消颗粒前期抗肿瘤作用及其特点的研究

4．3 癌痛消体外抑瘤作用的实验设计的分析

5 存在的问题与展望

结论

参考文献

中医药治疗原发性肝癌的研究进展

附录

致谢

攻读学位期间发表的学术论文目录

声明

个人简历