十一方药酒涂擦对兔膝关节软骨损伤微骨折技术后软骨修复的实验研究

摘要

目的:随着组织、细胞工程学近年来的发展，组织工程被利于治疗关节软骨缺损成为研究热点已久。虽与已投入到临床上使用的技术相比，组织工程用来修复关节软骨缺损是一项新技术，但由于其出现的时间还尚短，技术也尚末十分成熟，还有相关的临床研究仍在不断探究。而微骨折技术以其操作创伤小，简单，并发症少等优点已成为日前临床上修复膝关节软骨缺损的常选择的治疗方法。本实验旨在探讨用十一方药酒外涂治疗关节软骨损伤微骨折技术后软骨修复情况以及提供实验数据，从而更好的服务、指导临床工作。　　 方法:1、模型制备及分组:用6～8月龄的成年新西兰白兔40只，雌雄各半，在膝关节滑车关节面部制造成圆形全层软骨缺损模型，最后形成直径约4mm，深度约3mm的软骨全层缺损。造模2周后再次手术切开左膝关节进行微骨折技术处理，手术第7天后从微骨折技术处理过的兔子中随机选出24只兔子将其随机平均分成三组即:实验组A（药酒）、对照组B（纯酒）及空白对照组C，给予实验组A和对照组B左膝部分别涂擦十一方药酒和炮制十一方药酒用的纯酒，2ml/次，3次/d。　　 2、观察指标:三个组于用药干预满8周、12周时用空气栓塞法分别处死兔子4只，将兔左膝切开取材后肉眼大体观察标本，拍照后立即将股骨远端取下放入4％中性甲醛液中固定，以后对标本脱钙后行石蜡包埋，常规切片，在光镜下观察包括HE染色和甲苯胺蓝染色，根据wakitani评分标准评价标本的修复效果并进行统计学分析，以及Ⅱ型胶原的免疫检测。　　 结果:1、大体观察:所有实验用兔膝关节活动正常，伤口愈合良好;膝关节无感染、渗液及粘连;膝关节腔内可见清亮的关节液，软骨缺损区周围的软骨无明显磨损及骨赘出现。用药干预满8周，A组软骨缺损区的修复组织与周围正常软骨存在界限但较模糊、色泽较相近。修复组织的表面稍欠光滑，但具有一定的弹性。B组与C组外观相似，软骨缺损区被纤维组织部分充填，仍有空洞存在。用药干预满12周，A组修复组织表面已光滑，完全把缺损区填平，较有弹性，与周围软骨色泽很相近，界限已模糊不清。B组与C组缺损区仍可见明显的缺损，修复组织表面不平整。　　 2、组织学观察:用药干预满8周时对各组标本处理后在光镜下观察可见:A组修复组织表面比较光滑，填充组织与周围两侧正常软骨大部分结合。修复组织内的细胞呈现椭圆形或圆形，并出现软骨陷窝和软骨囊。但跟周围正常软骨间还存在一定的差异，主要表现为新生组织内细胞数量较多，细胞排列紊乱。修复组织的甲苯胺蓝染色异染性还较明显。B组标本光镜下所见与C组相似观察缺损区均可见大量空泡和纤维组织，修复组织与周围组织的愈合较差，软骨细胞排列也较紊乱。用药干预满12周，A组标本修复组织为透明样软骨，其表面已光滑，与两侧正常软骨组织愈合良好，细胞数目较前减少，呈现出的排列趋势为柱状。修复组织的甲苯胺蓝染色跟周围组织相近无明显差异。B组和C组表现相似，修复表面仍不光滑，软骨细胞的排列还不规则，仍有较多的纤维组织散在其间。跟周围的软骨组织愈合仍较差。修复组织的甲苯胺蓝染色仍呈明显异染性。　　 三组实验的组织学方面的评分:用药干预满8周、12周，A组的软骨缺损修复情况要优于B及C组(P＜0.05）;B、C组的软骨缺损修复情况无明显差异(P＞0.05)。各组12周的软骨缺损修复情况均优于8周。　　 3、Ⅱ型胶原的免疫组化:A组用药干预满8周，可见在修复组织内部分软骨细胞的胞浆呈现黄色，呈阳性的Ⅱ型胶原染色。B组和C组相似，细胞外间质和细胞质中Ⅱ型胶原染色呈现弱阳性（浅黄）;用药干预满12周，A组中修复组织的细胞呈椭圆形或圆形，呈现的排列趋势为柱状，Ⅱ型胶原表达呈现强阳性。　　 结论:十一方药酒涂擦对兔膝关节软骨损伤微骨折技术后软骨修复有促进作用，对创伤性关节软骨缺损的修复两者能发生协同作用，能有效修复兔膝关节软骨的4mm×4mm全层缺损，而制作药酒所用的纯酒对软骨无明显作用，从而为此疗法的临床应用提供了一定理论依据。

目录

摘要

引言

1 实验材料与方法

1．1 实验动物

1．2 实验仪器和试剂

1．3 主要试剂的配制

1．4 实验模型制作和干预用药

1．5 实验观察方法

1．6 统计学分析

2 实验结果

2．1 大体观察

2．2 组织学观察

2．3 Ⅱ型胶原的免疫组化

3 讨论

3．1 关节软骨损伤的临床治疗

3．2 关节软骨缺损损伤动物模型的制作

3．3 微骨折技术在修复缺损的关节软骨中的机制

3．4 微骨折技术的组织修复数量和质量

3．5 微骨折技术的优点、适应证及禁忌证

3．6 十一方药酒的组成、功效和临床

4 存在的问题与展望

结论

参考文献

附录

1．附图

2．附表

综述 关节软骨损伤动物模型研究进展

致谢

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