甘蔗叶指纹图谱的建立及其总黄酮抗炎作用研究

摘要

目的:本文以甘蔗叶为研究对象。研究甘蔗叶总黄酮的提取工艺，确定最佳提取工艺；测定甘蔗叶中总黄酮的含量；建立甘蔗叶高效液相色谱指纹图谱；进行甘蔗叶总黄酮提取物的抗炎作用研究。　　方法:1.甘蔗叶总黄酮的提取工艺研究:以甘蔗叶总黄酮的含量为评价指标，以提取温度、提取时间、固液比和乙醇浓度为考察因素，采用L9（34）正交试验法优化甘蔗叶总黄酮提取工艺。2.甘蔗叶中总黄酮的含量测定:采用分光光度法，以芦丁为对照品，AlCl3为显色剂，在417nm处进行甘蔗叶总黄酮含量测定。3.甘蔗叶指纹图谱的建立:采用HPLC法对17个不同品种的甘蔗叶进行分析。通过色谱条件优化、方法学考察研究，确认共有峰，建立对照指纹图谱，确定各种技术参数，应用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件（2004A版）计算指纹图谱的相似度。4.甘蔗叶总黄酮提取物的抗炎作用研究:采用不同类型的炎症小鼠模型，进行二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验、小鼠腹腔毛细血管通透性实验、小鼠棉球肉芽肿增生试验，观察甘蔗叶总黄酮的抗炎作用。　　结果:1.优选出甘蔗叶总黄酮提取的最佳工艺:溶剂为70％乙醇，料液比1:25，提取温度80℃，每次2h。2.三氯化铝显色法测定甘蔗叶总黄酮平均含量6.77mg/g，平均回收率95.5%，RSD=1.5%.3.建立甘蔗叶HPLC的指纹图谱。确定了如下色谱条件:检测长:320nm，流动相:乙腈-0.1%冰醋酸，梯度洗脱，柱温:25℃，流速:1ml·min-1，在95min内记录甘蔗叶的指纹图谱。根据国家中药注射液指纹图谱研究的技术要求，确定14个共有峰，其中15个品种的甘蔗叶相似度大于0.9。4.甘蔗叶总黄酮提取物能明显抑制小鼠耳廓炎症，对醋酸所致的小鼠腹腔毛细血管通透性增高有显著的抑制作用，对小鼠棉球肉芽肿增生有显著的抑制作用。　　结论:本研究所建立的甘蔗叶总黄酮提取工艺中，影响甘蔗叶总黄酮提取效率的主要因素为料液比，其次是提取温度；所建立的甘蔗叶中总黄酮的含量测定方法操作简便、准确，具有很好的重现性和稳定性；甘蔗叶总黄酮具有一定的抗炎作用；建立的HPLC指纹图谱有很好的稳定性、重现性、精密度，可用于甘蔗叶的鉴定。

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引言

正文

第一部分 甘蔗叶总黄酮的提取工艺研究

1 材料与仪器

2 实验方法与结果

3 讨论

第二部分 甘蔗叶总黄酮提取物的含量测定

1 实验方法

2 方法学考察

3. 甘蔗叶总黄酮提取物的含量测定

4. 讨论

第三部分 甘蔗叶HPLC指纹图谱的研究

1. 实验材料、仪器与试剂

2 供试品溶液制备方法的选择

3. 色谱条件的确定

4. 分析测定的方法学考察研究

5 指纹图谱的建立及技术参数

6 讨论

第四部分 甘蔗叶总黄酮的抗炎作用研究

1 实验材料

2 实验方法

3 统计学方法

4 结果

第五部分 结论与展望

参考文献

综述

致谢

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