清热化瘀Ⅱ号方对大鼠脑缺血再灌注损伤MMP-2、MMP-9表达的影响

摘要

目的：通过研究清热化瘀Ⅱ号方对大鼠脑缺血再灌注损伤MMP-2、MMP-9表达的影响，探讨其减轻缺血再灌注损伤的作用机制，为临床应用清热化瘀Ⅱ号方治疗急性缺血性中风提供理论和实验依据。　　方法：成年健康Sprague-Dawley(SD)大鼠110只，雌雄各半，随机分为空白组（5只）、假手术组（5只）、模型组（50只）、治疗组（50只），模型组、治疗组按缺血2h后再灌注3h、6h、12h、24h、48h分为5个亚组，每个时间点10只大鼠。采用灌胃法（ig）,每天二次，上午8～9点，下午3～4点各1次。连续预处理给药三天，最后一次于术前1h给予，术后继续灌胃用药，直至全部处死动物。治疗组灌胃清热化瘀Ⅱ号方,剂量为1.6ml/100g；空白组、假手术组和模型组分别灌胃与治疗组等量生理盐水；参照Longa等线栓法，并加以改进，制作急性大脑中动脉缺血再灌注损伤模型。保持大鼠局灶性脑缺血2h后进行再灌注，分别再灌注3h、6h、12h、24h、48h进行观察，采用Longa评分标准，合格者进入下一步操作，注意随时补充因不合格或死亡淘汰的大鼠，确保每组10只。测定各组实验大鼠脑组织含水量，观察其病理学形态变化及运用免疫组化的方法检测MMP-2、MMP-9的阳性表达水平。　　结果：1.各组脑组织含水量比较：模型组与假手术组比较，在各时间点脑组织含水量均明显升高(P<0.05)；治疗组与模型组比较，在各时间点脑组织含水量均明显降低(P<0.05)，但高于假手术组(P<0.05)；空白组和假手术组相比，脑组织含水量未见明显增加(P＞0.05)。　　2.运用HE染色各组大鼠脑组织切片进行组织形态学观察:假手术组和空白组细胞结构基本正常；模型组大脑皮质层和海马区结构完整性破坏，神经细胞间隙增宽，神经细胞不清甚至缺失，胞浆变红，核仁破坏、甚至核固缩或消失。治疗组大鼠皮质及海马区也可见神经元变性，核仁破坏，也有核固缩或消失现象，但神经元变性的数量明显少于模型组。　　3.免疫组化法处理脑组织切片观察MMP-2、MMP-9的阳性细胞数:　　(1)假手术组可见少量MMP-2、MMP-9阳性细胞数表达，模型组和治疗组在各时间点均可见明显增多的MMP-9和MMP-2的阳性细胞表达；　　(2)MMP-9阳性表达细胞数在缺血再灌注3h、6h有少量表达，再灌注12h开始显著增加，再灌注24h、48h继续明显增加；治疗组与模型组比较，在各时间点MMP-9阳性表达细胞数均减少(P<0.05)，但高于假手术组(P<0.05)；　　(3)MMP-2阳性表达细胞数在缺血再灌注3h、6h、12h有少量表达，再灌注24h开始明显增加，再灌注48h继续显著增加；治疗组与模型组比较，在各时间点MMP-2阳性表达细胞数均减少(P<0.05)，但高于假手术组(P<0.05)。　　结论：　　1.清热化瘀Ⅱ号方能降低脑组织含水量，改善缺血区的病理组织学变化,具有减轻脑水肿的作用；　　2.清热化瘀Ⅱ号方能明显降低MMP-2、MMP-9的表达，具有抗脑缺血再灌注损伤的作用，其机理可能是清热化瘀Ⅱ号方能抑制MMP-2、MMP-9的表达。

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引言

正文

1 实验材料

1.1 实验对象

1.2 主要实验设备及材料

1.3 主要实验药品及试剂

2 实验方法

2.1 动物造模及纳入标准

2.2 实验分组、给药方法

2.3 观察指标

2.4 统计学处理

3 结果分析

3.1 模型结果

3.2 脑组织病理学观察

3.3 各组再灌注后不同时间点大鼠脑组织含水量的比较

3.4 免疫组化法检测MMP-2的表达

3.5 免疫组化法检测MMP-9的表达

4 讨论

4.1 现代医学对脑缺血再灌注损伤病机的认识

4.2 MMP-2、MMP-9与脑缺血再灌注损伤的关系

4.3 中医对缺血性中风认识的理论渊源

4.4 清热化瘀Ⅱ号方的方解

4.5 清热化瘀Ⅱ号方对脑缺血再灌注损伤脑组织MMP-2、MMP-9的影响

5 存在的问题和展望

结论

参考文献

附图

综述

致谢

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