17β-雌二醇的快速舒血管效应及其内皮依赖和非内皮依赖的作用机制

摘要

目的 本课题采用Myodap血管张力仪进行体外血管灌流实验，测量雌性SD大鼠离体胸主动脉环等长张力，旨在观察17β-雌二醇(17β-estradiol，E<,2>)的快速舒血管效应并探讨其内皮依赖和非内皮依赖性的作用机制。血管张力改变将导致高血压、动脉粥样硬化等多种心血管疾病的发生，本研究将为阐明雌激素扩张血管的作用机制提供理论和实验依据。 本论文主要包括以下两个部分： 第1章 17β-雌二醇的快速舒血管效应及其内皮依赖性作用机制 第2章 17β-雌二醇快速舒血管效应的非内皮依赖性作用机制 方法 1.离体血管环的制备和张力测定雌性SD大鼠断颈处死，迅速分离胸主动脉，放入预冷的Lrebs液，去除血管上的脂肪及结缔组织，将动脉剪成2段长2mm的血管环，置于10ml含Kerbs液的器官小室中。两根细金属丝分别由血管内腔穿过血管环，并固定于Myodap血管张力仪(丹麦，Danish Myo TechnologyA/S)两端的肌动描记器装置上，将温度设定在37℃，持续充以95﹪O<,2>和5﹪CO<,2>的混合气体。调整血管环至适当的前负荷(通过血管张力仪标准化步骤确定)，平衡60～90min，期间每隔20min更换Kebs液一次。实验血管先用苯肾上腺素(PE，10<'-6>mol/L)鉴别血管收缩活性，一些实验血管需去除内皮，采用不绣钢丝插入血管腔中轻轻滚动完成，用ACh(10<'-5>mol/L)检测内皮完整性，对ACh舒张大于70﹪认为内皮完整，舒张消失则认为内皮破坏成功。冲洗血管环再次平衡至基线水平，然后进行实验。 2.电子显微镜内膜完整的主动脉血管环分别用Krebs(对照)或6mmol/L甲基-β-环糊精处理60min，4℃固定过夜放在含2﹪戊二醛、2﹪多聚甲醛和蔗糖的0.1mol/L的二甲砷酸钠盐溶液中，样本用0.1mol/L的二甲砷酸钠盐溶液冲洗，然后再次固定于4﹪锇酸中1h，样本用乙醇脱水、用环氧树脂包埋在Epon812，超薄切片用醇制的醋酸双氧铀和枸橼酸铅二重染色，用透射电子显微镜观察内膜结构。 结果 1.E<,2>对预收缩血管的效应及去除内皮的影响内皮完整或去内皮的血管环，用PE(10<'-6>mol/L)或高钾(100mmol/L)预收缩，约20～30min达到最大稳定状态，然后分别加入不同浓度的E<,2>(10<'-9>～1O<'-4>mol/L)。结果显示，E<,2>浓度为10<'-9>mol/L时，没有观察到血管舒张，10<'-8>～10<'-6>mol/L时，E<,2>呈浓度依赖性地舒张血管，约5分钟起效，40分钟达到平衡，去内皮的血管环舒张程度明显小于内皮完整的血管环；但在E2浓度增高至10<'-5>～10<'-4>mol/L时，去内皮与内皮完整的血管环血管舒张程度无差异(内皮完整：(67.18±9.58)﹪，去内皮：(57.99±8.57)﹪；n=10；P>0.05)。 2. L-NAME和MB对E<,2>舒血管作用的影响L-NlAME是一氧化氮合酶(NOS)的抑制剂，MB是鸟苷酸环化酶(GC)的抑制剂。内皮完整的血管环用L-NAME(10<'-4>mol/L)或MB(10<'-5>mol/L)孵育20min，然后用PE或高钾预收缩，稳定后分别加入E<,2>(10<'-6>、10<'-5>mol/L)。结果表明，L-NAME或MB可以显著抑制E<,2>(10<'-6>mol/L)的舒血管效应；但是L-NAME或MB并不抑制E<,2>(10<'-5>mol/L)的舒血管效应；去内皮与内皮完整用L-NAME或MB孵育的血管环舒张没有统计学差异。 3．Tramoxifen对E2舒血管效应的影响为了观察雌激素受体是否参与介导了雌激素快速舒张血管的作用，内皮完整的血管环，用选择性雌激素受体调节剂Tamoxiofen(Ta，他莫昔芬，10<'-5>mol/L)孵育30min，用PE预收缩，加入E<,2>(10<'-6>mol/L)，与对照组不用Tamoxifen孵育比，观察到E<,2>舒血管效应显著抑制。 4. 甲基-β-环糊精对质膜微囊结构的影响用透射电子显微镜观察甲基-β-环糊精对主动脉内膜质膜微囊结构的影响。与对照组用Krebs液孵育比较，内膜完整的血管环，甲基-β-环糊精处理(Mβ CD，6mmol/L，60min)后，质膜微囊结构显著被破坏。 5. 甲基-β-环糊精对E<,2>舒张血管效应的影响内膜完整的血管环，用甲基-β-环糊精(M β CD，6mmol/L)预处理60min后，用高钾预收缩，稳定后加入不同浓度E<,2>(10<'-8>～10<'-5>mol/L)。结果表明，与对照组不用MβCD处理相比，E<,2>(10<'-8>～10<'-6>mol/L)诱导的血管舒张效应显著被抑制，但是高浓度的E<,2>(10<'-5>．mol/L)诱导的血管舒张效应不被抑制。 6.E<,2>对CaCl<,2>发缩量效曲线的影响为研究高浓度E<,2>是否主要通过抑制细胞外钙内流而直接舒张血管平滑肌，在去内皮的血管环，测量E<,2>对CaCl<,2>在无钙高钾溶液中收缩的影响。去内皮的血管环，用无钙Krebs溶液冲洗三次(间隔10min)，稳定后，换用无钙高钾溶液(含1mmol/LEGTA，60mmol/LK<'+>)，无/有E<,2>(10<'-5>、10<'-4>mol/L)孵育30min，累积加入CaCl<,2>(5×10<'-4>、10<'-5>、5×10<'-5>、10<'-2>mol/L)。结果显示，在无钙高钾溶液中，CaCl<,2>诱导浓度依赖性血管收缩，E<,2>(10<'-5>、10<'-4>mol/L)孵育可抑制CaCl<,2>诱导的血管收缩，使CaCl<,2>收缩量效曲线右移。 结论 1.雌激素具有快速舒血管效应，既有内皮依赖性作用机制，也有非内皮依赖性作用机制，与雌激素作用的浓度有关。 2.雌激素浓度为10<'-9>mol/L时，没有观察到血管舒张效应，浓度为10<'-8>～10<'-6>mol/L时，雌激素能浓度依赖性的快速舒张血管，作用呈内皮依赖性，与雌激素受体介导内皮释放NO有关，且需要内膜质膜微囊结构完整。 3.高浓度雌激素(10<'-5>～10<'-4>mol/L)主要是通过抑制细胞外的钙内流直接舒张血管，为非内皮依赖性。

目录

文摘

英文文摘

第1章17β-雌二醇的快速舒血管效应及其内皮依赖性作用机制

1.1引言

1.2材料和方法

1.3结果

1.4讨论

1.5小结

1.6参考文献

第2章17β-雌二醇快速舒血管效应的非内皮依赖性作用机制

2.1引言

2.2材料和方法

2.3结果

2.4讨论

2.5小结

2.6参考文献

结论

附录一综述雌激素激活血管eNOS的机制

附录二发表论文摘要

附录三硕士期间发表文章

附录四中英文缩写对照

附录五血管张力记录仪照片

致谢

原创性声明