水产源肠杆菌中mcr-1基因的流行分布及分子特征研究

摘要

mcr-1 基因的出现为解释黏菌素耐药性的产生带来了新的观点，作为由质粒介导并可水平传播的代表性耐药基因，世界各地掀起了对其研究的热潮。多项研究表明mcr-1 基因流行范围广泛，涉及多个宿主来源，在多种质粒中存在耐药基因共转移现象。然而，在水产源中关于mcr-1基因的报道却很少，为了更好的研究mcr-1基因的流行分布及分子特征。本研究对广州市水产源中mcr-like基因进行了流行性调查，为抗生素耐药基因在水环境中的传播提供基础数据。　　本研究的水产源采集对象为9个农贸市场的123个淡水鱼样、34份鳄鱼肠道样及海洋中的43个生蚝样、12份水样、12份泥样。结果检测到7.32%（9/123）的淡水鱼肉类样品、11.38%（14/123）淡水鱼肠道样品、44.18%（15/34）鳄鱼肠道样品为mcr-1阳性，水产源mcr-1基因样品阳性率为15.18%（34/224）。所有mcr-1阳性菌株经鉴定均为大肠杆菌。采用琼脂稀释法测定mcr-1阳性菌株对多种抗生素的敏感性，结果显示对四环素、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、庆大霉素、链霉素耐药率分别为100%、86.84%、84.21%、84.21%，对头孢噻肟、环丙沙星、萘啶酸耐药率均为78.95%，紧随其后的是对氟苯尼考及喹乙醇76.32%、71.05%的耐药率，所有mcr-1阳性菌株对阿米卡星和美罗培南呈现敏感状态。PFGE结果显示，来自不同农贸市场的淡水鱼样 mcr-1阳性菌株可分为 14 个种系进化群，MLST 结果显示 ST10 是最流行的序列类型，其次是ST1114、ST3937和 ST211；鳄鱼肠道中分离的 mcr-1 阳性菌株可分为 3个种系进化群，菌株遗传背景差异较小，71.42%的菌株为ST117序列类型。接合转移成功12株， S1-PFGE验证了携带mcr-1基因的质粒大小在54.7 kb ~250 kb之间。在全基因组测序中，随机选取了3株未能接合转移的mcr-1阳性大肠杆菌，分析得到mcr-1基因位于IncHI2质粒（n=1）、IncI2质粒（n=1）及含2个拷贝的染色体（n=1）。除了mcr-1基因外，还发现了多种抗生素耐药基因，如qnrS、floR、oqxAB、aac(6’)-Ib-cr、blaCTX-M-1G和fosA3。这些数据表明了在当地不同农贸市场的水产品中，mcr-1阳性菌株存在着克隆分布及多重耐药现象。水环境是抗生素耐药基因的储蓄室，水产品中耐药基因的检出提示着食品安全存在着潜在的风险。

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