滇黔桂地区土壤虫生真菌分离鉴定研究

摘要

为减缓化学杀虫剂的使用带来的环境问题，利用虫生真菌进行害虫生物防治日益受到重视，虫生真菌资源的调查与采集成为一个重要的研究方向，土壤中蕴含的丰富的虫生真菌资源有待开发利用，云南（滇）、贵州（黔）与广西（桂）地区温暖多雨、地形地貌多变、生物多样性丰富，但是人们对该地区土壤中虫生真菌的了解不足。本论文是全国土壤虫生真菌分离鉴定项目的一部分，拟从滇黔桂地区采集土壤样品，再从中分离出真菌菌株，利用形态学、分子生物学技术鉴定菌株属种，通过生物活性测定了解不同菌株对烟粉虱的致病活性。主要研究结果如下：　　（1）从上述地区采集了147份土壤样品，滇黔桂地区分别为36、34、77份样品；从其中137份样品中分离到真菌菌株316株，平均分离率93.2%，分别从滇黔桂地区的33、31、73份土壤样品分离出60、86、170株真菌，分离率分别为91.7%、91.2%、94.8%；平均每份土样分离2.1株菌株，滇黔桂地区每份土样分离菌株数分别为1.7、2.5、2.2株，而采自杂草地、桉树林、非桉树林、耕地、荒地等环境的土壤样品的每份土样分离菌株数分别为2.6、1.9、2.1、1.6、2.5株。　　（2）通过菌落形态、产孢结构、分生孢子形态等特征，以及rDNA-ITS和mtDNA COI基因序列的同源性比对，鉴定出来自7属17种的174株已知虫生真菌，占土样分离真菌总量的55%。包括淡紫紫孢菌Purpureocillium lilacinum（原名：淡紫拟青霉Paecilomyces lilacinus）56株、金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae28株、玫烟色棒束孢Isaria fumosorosea20株、马昆德拟青霉Paecilomyces marquandii20株、球孢白僵菌Beauveria bassiana10株、黄绿绿僵菌Metarhizium flavoviride8株、Purpureocillium lavendulum8株、肉色拟青霉Paecilomyces carneus6株、厚垣普奇尼亚菌Pochonia chlamydosporia4株、球芽普可尼亚菌Pochonia bulbillosa4株、桔青霉Penicillium citrinum4株、Beauveria felina1株、布氏白僵菌Beauveria brongniartii1株、环链棒束孢Isaria cateniannulata1株、粉棒束孢Isaria farinosa1株、贵州绿僵菌Metarhizium guizhouense1株、爪哇棒束孢Isaria javanica（原名：爪哇拟青霉Paecilomyces javanicus） 1株。　　（3）选取10个未见报道致病昆虫的真菌菌株，以球孢白僵菌Beauveria bassiana BbYN8702菌株为参照，采用浸渍法测定不同菌株对烟粉虱二龄若虫的致病活性。结果表明，使用浓度为108 spores·mL-1孢子悬浮液处理，到第10天，其中，球孢白僵菌Beauveria bassianaBbYN8702菌株、枝顶孢菌Acremoniumsp.A.YN0403菌株、蜡蚧菌Lecanicilliumsp.L.GZ5303菌株、粉红粘帚霉Clonostachys roseaCrGX21G03菌株、丛赤壳属菌Nectriasp.N.GX2905菌株、布兰施帚霉Scopulariopsis brumptiiSbGX7705菌株、疣状瓶霉Phialophora verrucosaPvGX77A02菌株等7个菌株对烟粉虱致病率分别为55.56%、27.08%、90.97%、44.04%、35.75%、29.02%、38.34%，致死中时间LT50为 9.11d、18.37d、6.44d、11.14d、12.87d、16.14d、12.70d。另外，马昆德拟青霉Paecilomyces marquandiiPmGZ4202菌株、球孢枝孢菌Cladosporiumsphaerospermum CsGZ5706菌株、矛束霉Doratomyces sp. D.GX11G02菌株，以及被孢霉Mortierella sp. M.GX13S05菌株等4个菌株，对烟粉虱不致病。

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