安徽恒河猴的实验动物化研究

摘要

随着生物医学研究的发展,实验用恒河猴(猕猴)数量增加,出口需求也增多。我国恒河猴分布广泛,各亚种在地理分布、形态、遗传、行为等方面存在着差异,开发利用不同亚种的恒河猴作为实验动物,增加实验恒河猴的品种和数量,促进实验动物科学健康发展。安徽恒河猴属于福建亚种,是具有潜在应用价值的实验动物种质资源,对安徽恒河猴进行实验动物化,建立封闭群恒河猴,并按不同要求培育出普通级和SPF级实验恒河猴群,可为生命科学研究提供数量与质量合格的实验恒河猴。本文就安徽恒河猴的野外分布与人工饲育、遗传特征及微生物学和寄生虫学检测等方面进行了初步研究,为安徽恒河猴的实验动物化工作奠定科学的基础。
　　安徽南部山区地形复杂、植被多样,保存着丰富的野生灵长类资源,其中恒河猴种群51群,总数3439~3849只,分布海拔范围为200～1153m。安徽省实验猕猴中心,位于黄山市祁门县城郊,环境条件优越,为开发利用安徽野生恒河猴资源,人工繁育实验恒河猴提供了良好的条件。
　　要建立封闭群的安徽实验恒河猴,进行封闭群的引种和遗传学监测,掌握安徽恒河猴的遗传特征是首要的工作,包括对安徽恒河猴的形态特征分析和遗传多样性分析。
　　对18只安徽野生恒河猴进行了活体测量,测量变量分别为:体重、躯干长、尾长、颧宽、额宽、龈点-枕外隆凸点(Pr-In)、鼻根点-龈点(Na-Pr)、上犬齿间宽、雄性睾丸长度和宽度。结果显示亚成年雌性的尾长均值达178.50 mm,稍长于成年雌性的尾长均值(176.44mm),除此之外,形态变量大小:成年雄性﹥成年雌性﹥亚成年雌性。成年雄性、成年雌性和亚成年雌性的体重均值分别为8.64kg、7.16kg和6.20kg,躯干长均值分别为388.00mm、380.67mm和335.25mm。t-检验结果显示体重变量具有显著的性别差异(P﹤0.05),而躯干长变量具有显著的年龄差异(P﹤0.05)。结果表明安徽恒河猴形态特征符合Allen定律和Bergman定律,属于福建亚种恒河猴,同时兼具本地特色。
　　选择微卫星标记分析安徽恒河猴的遗传多样性水平。从12个微卫星标记中筛选出了9个具多态性的标记(D1S207、D1S548、D3S1768、D5S820、D6S311、D6S2741、D8S1106、D13S159和D14S306),在33只安徽恒河猴中共检测到72个等位基因,平均等位基因数为8个,多态信息含量PIC=0.788±0.121,群体杂合度H=0.825±0.106.与印度、尼泊尔、中国海南和广西等地的恒河猴比较,安徽恒河猴种群有着丰富的遗传多样性。
　　微生物和寄生虫的携带状况反映了实验动物的身体状况,直接影响着生物医学实验结果的可靠性程度,因此对安徽恒河猴进行微生物学和寄生虫学检测,掌握其微生物和寄生虫携带状况,是确定实验恒河猴育种方向的基础工作。
　　5只受检的人工繁育的安徽恒河猴健康状况良好,没有感染沙门菌、皮肤病原真菌、志贺菌和结核分枝杆菌的这四种病原菌。29只安徽恒河猴的病毒抗体检测结果发现,猕猴疱疹病毒1型(BV)和猴痘病毒(SPV)抗体的阳性率分别为20.7％(6/29)和10.0％(2/20),没有发现猴反转录D型病毒(SRV)、猴免疫缺陷病毒(SIV)和猴T细胞趋向性病毒Ⅰ型(STLV-1)的抗体。安徽恒河猴没有感染这三种反转录病毒和四种病原菌,是极大的优势,因此培育SPF级安徽恒河猴群的重点在于淘汰BV和SPV阳性猴。
　　肉眼检测20只安徽恒河猴体表,未发现体外寄生虫。39份人工繁殖的恒河猴粪便样品的总寄生虫感染率(指至少检测出一种寄生虫的百分比)为38.5％,检测到溶组织内阿米巴和5种蠕虫(粪类圆线虫、猴结节线虫、绦虫、钩虫、蛔虫),感染率最高的是粪类圆线虫和猴结节线虫。需使用药物进行针对性治疗,并加强病源猴的控制和管理。
　　本研究表明,安徽恒河猴是福建亚种的典型代表,具有丰富的遗传多样性,掌握的遗传学背景特征可用于建立遗传性一致的封闭群安徽恒河猴;安徽恒河猴已达到普通级猴的病原菌检测指标,基本达到普通级寄生虫学要求,因此加强对BV的定时监控,就能建立符合标准的普通级实验恒河猴。

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第一章 绪论

1.1 实验动物与实验动物化

1.2国内的恒河猴资源

1.3 非人灵长类动物的培育现状

1.4立题依据、研究内容及意义

第二章 安徽恒河猴的野外分布和人工饲育情况

2.1 安徽省的自然环境

2.2 安徽恒河猴的野外分布

2.3 安徽恒河猴的人工饲育

第三章 安徽恒河猴的遗传学特征

3.1 形态特征

3.2 遗传多样性分析

第四章 安徽恒河猴的微生物学和寄生虫学检测

4.1 材料与方法

4.2 结果

4.3 讨论

结论

本课题的进一步设想

参考文献

附录1：封闭群恒河猴、SPF级恒河猴群和普通级恒河猴的培育方案

附录2：安徽省实验猕猴中心笼养的安徽恒河猴

致谢

硕士期间发表的学术论文