基于动力学控制机制从复杂蛋白质组中分离活性形式的代谢性丝氨酸水解酶：丁酰胆碱酯酶作为案例研究

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缩略词表

第一章 绪论

1.1 引言

1.2 常见的哺乳动物SHs及其功能

1.2.1 脂肪酶

1.2.2 羧酸酯酶

1.2.3 胆碱酯酶

1.2.4 磷脂酶

1.2.5 其它的 SHs酶

1.3 SHs的主要分析方法：基于活性的蛋白分析（ABPP）

1.4 分离纯化蛋白的常用亲和色谱方法

1.4.1 常见的含有亲和标签的亲和色谱法

1.4.2 金属螯和亲和色谱法

1.4.3 免疫亲和色谱法

1.4.4 其它方法

1.5 mSHs 与氨基甲酸酯类抑制剂之间的酶动力学

1.5.1 mSHs 与氨基甲酸酯类抑制剂之间的酶动力学

1.5.2 二级酰化速率常数（kI）和脱氨基甲酰化速率常数（k3）的测定与计算方法

1.6 研究背景、意义和内容

1.6.1 研究背景

1.6.2 研究意义

1.6.3 研究内容

第二章 氨基甲酸酯探针的合成及亲和吸附剂的制备

2.1 引言

2.2 实验材料

2.2.1 实验试剂

2.2.2 实验仪器

2.3 实验方法

2.3.1 血浆样品制备及溶液配制

2.3.2 化合物 1，2，3和 4的合成

2.3.3 亲和吸附剂的合成

2.3.4 亲和吸附剂的表征方法

2.3.5 化合物 3与 hBChE相互作用动力学表征

2.4 结果与讨论

2.4.1 化合物的结构表征，纯度检测和产率计算

2.4.2 亲和吸附剂的表征

2.4.3 化合物 3与血浆中的 hBChE相互作用动力学表征

2.4.4 本章总结

第三章 基于氨基甲酸酯探针亲和色谱性能的评价

3.1 引言

3.2 实验材料

3.2.1 实验试剂

3.2.2 实验仪器

3.3 实验方法

3.3.1 溶液的配制

3.3.2 亲和吸附剂与血浆中相关蛋白的相互作用机制研究

3.3.3 影响血浆中 hBChE分离的因素探究

3.3.4 亲和吸附剂的最大上样量和使用重复性能测试

3.3.5 hBChE活性测试

3.3.6 非变性凝胶电泳实验

3.4 结果与讨论

3.4.1 亲和吸附剂与血浆中相关蛋白相互作用机制结果分析

3.4.2 影响血浆中 hBChE分离的因素结果分析

3.4.3 亲和吸附剂使用重复性结果分析

3.4.4 本章小结

第四章 亲和吸附剂所分离蛋白的定性及定量分析

4.1 引言

4.2 实验材料

4.2.1 实验试剂

4.2.2 实验仪器

4.3 实验方法

4.3.1 溶液的配制

4.3.2 蛋白质的分离方法

4.3.3 hBChE回收率的测定

4.3.4 总蛋白的定量

4.3.5 蛋白质组学分析

4.4 结果与讨论

4.4.1 hBChE回收率的测定

4.4.2 总蛋白的定量及 hBChE比活性和纯化因子的计算

4.4.3 蛋白质组学分析

4.4.4 本章小结

结论与展望

结论

创新之处

展望

参考文献

附 录

攻读硕士学位期间取得的研究成果

致 谢

答辩决议书