哈维氏弧菌yjeE和yeaZ基因定点突变及生物学性质研究

目录

声明

第1章 绪论

1.1 哈维氏弧菌分布及生物学性质

1.2.1 VBNC形成及特征

1.2.2 VBNC细胞的生物学特性

1.2.3 VBNC细菌的检测和复苏

1.3.1 Rpf的发现

1.3.2 Rpf蛋白家族基因特性

1.3.3 Rpf在环境中的应用

1.4 细菌YjeE的研究进展

1.4.1 YjeE蛋白家族发现及基因组成

1.4.2 YjeE蛋白家族生物学活性

1.5.1 课题研究内容

1.5.2 课题创新点

1.6 本课题研究意义及目的

第2章 哈维氏弧菌VBNC状态的培养及复苏作用研究

2.1 前言

2.2.1 实验菌株

2.2.2 培养基、试剂和仪器

2.2.3 H2O2诱导的哈维氏弧菌VBNC状态

2.2.4 VBNC状态哈维氏弧菌的复苏

2.2.5 VBNC状态复苏后哈维氏弧菌的生物学特性

2.3 结果与分析

2.3.1 H2O2诱导的哈维氏弧菌VBNC状态

2.3.2 VBNC状态哈维氏弧菌的复苏

2.3.3 VBNC状态复苏后哈维氏弧菌的生物学特性

2.4 讨论

第3章 哈维氏弧菌YjeE蛋白的酶活性及性质研究

3.1 前言

3.2.1 菌株与质粒

3.2.2 主要设备和试剂

3.2.3 yjeE基因突变位点的选择及突变点序列

3.2.4突变体表达质粒的酶切与序列鉴定

3.2.5重组质粒的转化与抽提

3.2.6 YjeE及其突变蛋白的表达与纯化

3.2.7纯化的YjeE突变蛋白浓度测定

3.2.8 ATP酶活性的测定

3.2.9 YjeE及其突变体蛋白的促生长作用

3.2.10 YjeE 蛋白对VBNC 状态哈维氏弧菌细胞的复苏

3.3 结果与分析

3.3.1 YjeE突变蛋白的表达及纯化

3.3.2 纯化的YjeE突变体蛋白的浓度

3.3.3纯化的YjeE突变体蛋白的ATP酶活性

3.3.4 YjeE及其突变体蛋白对哈维氏弧菌的促生长作用

3.3.5 YjeE蛋白对VBNC状态哈维氏弧菌细胞的复苏

3.4 讨论

第4章 哈维氏弧菌YeaZ酶活性与生物学作用分析

4.1 前言

4.2.1 实验菌株

4.2.2 实验试剂与仪器

4.2.3 哈维氏弧菌YeaZ及突变蛋白的原核表达与纯化

4.2.4 纯化的YeaZ突变蛋白浓度测定

4.2.5突变YeaZ蛋白的酶活性测定

4.2.6纯化YeaZ对牛血清白蛋白水解活性

4.2.7 YeaZ蛋白对哈维氏弧菌SF-1的生长促进作用

4.2.8 YeaZ及突变蛋白对VBNC状态哈维氏弧菌的复苏作用

4.3 结果与分析

4.3.1 YeaZ活性位点氨基酸突变蛋白的表达纯化

4.3.2 纯化的YeaZ突变蛋白的浓度

4.3.3 突变YeaZ蛋白对酶活性的影响

4.3.4纯化YeaZ对牛血清白蛋白水解活性

4.3.5 YeaZ对哈维氏弧菌SF-1生长促进作用

4.3.6 YeaZ及突变蛋白对VBNC状态哈维氏弧菌复苏促进作用

4.4 讨论

结论

参考文献

致谢

附录 攻读学位期间所发表的学术论文目录