新型预血管化的神经导管修复脊神经损伤的研究

摘要

目的：　　基于预血管化干细胞膜片，构建预血管化的神经导管，技术进行脊神经损伤修复的研宄，为神经损伤提供更好的解决方法。　　方法：　　1)预血管化干细胞膜片基神经导管的构建：全骨髓贴壁法分离兔骨髓间充质干细胞（MSCs);运用MTT法测定细胞生长曲线；检测MSCs的多项分化潜能，包括成骨诱导分化，成脂诱导分化及成神经样细胞诱导分化；MSCs高密度连续培养5d后接种人脐静脉内皮细胞（HUVECs)然后再连续培养5d形成预血管化干细胞膜片；将预血管化干细胞膜片复合于管状支架上，培养10d后将其取下，获得新型预血管化干细胞膜片导管；用HE染色、扫描电镜（SEM)及CD31、CollagenI和Fibronectin免疫荧光对预血管化干细胞膜片导管进行检测。2)新型预血管化干细胞膜片导管进行大鼠脊神经损伤的修复:大鼠脊髓损伤（SCI)模型的构建；将预血管化干细胞膜片导管植入大鼠脊髓损伤部位，单纯干细胞膜片组及空白组作为对照组；植入后每周进行BBB评分；于植入后第2、第8周处死动物，对标本进行染色、CD31、Tuj-1、GFAP免疫荧光染色。　　结果与结论：　　1)成功构建出新型预血管化干细胞膜片导管。分离出的干细胞具有成骨、成脂及成神经元样细胞分化的能力，其细胞预血管化的细胞膜片富含CD31,CollagenI以及Fibronectin。其表面粗糙，其上有微血管结构形成；2)将新型预血管化干细胞膜片导管修复大鼠脊神经损伤，可以得到较好的功能和组织修复效果。植入2W起预血管化干细胞膜片导管组的BBB份数明显高于空白组(P<0.05)，第4W起预血管化干细胞膜片导管组的BBB分数高于单纯干细胞膜片导管组（P〈0.05)。免疫荧光结果显示第2W，预血管化细胞膜片导管组Tuj—1的表达量略高于其余两组。第8W，预血管化细胞膜片导管组Tuj—1的表达量明显高于其余两组，空白组的GFAP的表达量高于其余两组。所以预血管化干细胞膜片导管对于脊髓损伤大鼠功能和组织学的修复有促进作用。

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