人参有效组分对皮肤细胞及B淋巴母细胞的保护作用及枸杞有效组分的初筛

摘要

人参及枸杞作为传统中药材，对人体具有调整血压、恢复心脏功能、增强免疫等作用。为了综合利用开发人参及枸杞产品，提高其药用价值，以人皮肤成纤维细胞及人B淋巴母细胞作为模型，研究人参及枸杞有效组分对人体健康的影响。　　本研究的目的为：1）人参有效组分Gx是否对人皮肤细胞具有保护作用；2）人参有效组分Gx是否能够改善免疫细胞功能；3）对初步分离的枸杞各组分进行免疫活性的初筛。　　结果显示：1）Gx能够缓解由ROS引起的人皮肤成纤维细胞的氧化应激损伤。首先显微观察到，Gx可以改善ROS损伤处理的人皮肤成纤维细胞形态；其次SRB方法测定发现，Gx提高损伤细胞的增殖率；使用免疫荧光方法进一步探索Gx保护细胞形态的机理，发现Gx恢复损伤细胞的骨架相关蛋白Tubulin、跨膜蛋白Integrin和胞外基质蛋白Fibronectin的有序排列，并且Western blotting检测结果显示Gx调控损伤细胞内MMP-1蛋白的含量。　　2）Gx能够保护由重离子辐照引起的人B淋巴母细胞的损伤。首先观察到损伤的细胞形态得到恢复。流式细胞术方法检测到Gx可以降低损伤细胞的凋亡，并且降低细胞内ROS的水平。此外，ELISA方法发现Gx调控TNFα和IL-1α的分泌。　　3）以人B淋巴母细胞为细胞模型，使用过氧化氢对细胞造成氧化损伤，研究了共14种枸杞有效组分的免疫活性(Gj1~5,Gq1~6,D1~D3)。其中3种枸杞酒提取物Gj1、Gj4、Gj5和2种地骨皮(枸杞植株根部)提取物D2、D3对氧化损伤的免疫细胞具有保护作用，并调节细胞内炎症相关因子TNFα和IL-1α的表达分泌。　　总之，人参有效组分Gx具有保护皮肤细胞及改善免疫细胞功能的作用。枸杞组分初筛说明枸杞组分(D2、D3、Gj1、Gj4、Gj5)具有免疫活性。我们的研究揭示人参有效组分Gx及枸杞有效组分具有潜在的开发利用价值。

目录

声明

中英文缩写对照表

第一章 前言

1.1皮肤损伤保护的研究进展

1.1.1皮肤损伤的模型

1.1.2皮肤细胞损伤的可能途径

1.1.3天然产物在皮肤保护中的应用

1.2辐射损伤免疫功能的研究进展

1.2.1辐射诱导免疫损伤的可能途径

1.2.2人参在免疫损伤保护方面的应用现状

1.3枸杞的免疫活性

1.4 研究目的和意义

第二章 材料与方法

2.1实验材料

2.1.1 试剂与仪器

2.1.2 主要溶液配置

2.2 实验方法

2.2.1 台盼蓝计数

2.2.2 磺基罗丹明B（SRB）方法测定细胞毒

2.2.3 酶联免疫分析法（ELISA）测定IL-1α、TNFα

2.2.4 流式细胞术测定细胞凋亡

2.2.5 流式细胞术测定细胞内ROS

2.2.6 蛋白免疫印记（Western Blotting）

2.2.7 免疫荧光

2.2.8 H2O2处理和重离子辐照条件

第三章 结果与分析

3.1 人参有效组分Gx保护氧化损伤的人皮肤成纤维细胞

3.1.1 人参有效组分Gx改善损伤细胞的形态

3.1.2 人参有效组分Gx提高损伤细胞的增殖率

3.1.3 人参有效组分Gx恢复微管蛋白的表达排列

3.1.4人参有效组分Gx恢复整联蛋白的表达排列

3.1.5人参有效组分Gx恢复纤连蛋白的表达排列

3.1.6人参有效组分Gx恢复MMP-1蛋白的分泌

3.2人参有效组分Gx保护重离子辐照损伤的人B淋巴母细胞

3.2.1 人参有效组分Gx改善细胞形态

3.2.2人参有效组分Gx促进细胞增殖

3.2.3人参有效组分Gx抑制细胞凋亡

3.2.4 人参有效组分Gx抑制ROS的产生

3.2.5人参有效组分Gx调控炎症因子的分泌

3.3枸杞有效组分保护氧化损伤的人B淋巴母细胞

3.3.1 枸杞皮渣提取物的免疫活性初探

3.3.2 枸杞酒提取物的免疫活性初探

3.3.3 地骨皮提取物的免疫活性初筛

3.3.4 枸杞有效组分对氧化损伤细胞的保护作用

3.3.5 枸杞有效组份调控炎症因子的分泌

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

在学期间的研究成果

致谢