声明
第一章 前言
1.1基因沉默概述
1.1.1 基因沉默
1.1.2 基因沉默介导的植物抗病毒
1.1.3 病毒编码的沉默抑制子
1.2水稻条纹花叶病毒（RSMV）的研究概况
1.2.1 弹状病毒概述
1.2.2 弹状病毒的分类和传播
1.2.3 RSMV的发生与危害
1.2.4 传播介体及症状特点
1.2.5 RSMV的病毒粒体及基因组结构和功能
1.2.6 弹状病毒编码的蛋白
1.3 蛋白质降解途径
1.4 本研究使用的核心技术体系
1.4.1 水稻的遗传转化技术
1.4.2 实时荧光定量PCR（Quantitative real-time PCR）技术
1.4.3 蛋白质互作研究体系
1.5 本研究目的与意义
第二章 RSMV编码的基质蛋白M是一个RNA沉默抑制子
2.1 材料与方法
2.1.1主要材料
2.1.2主要试剂
2.2 方法
2.2.1 Trizol法提取植物总RNA
2.2.2 反转录合成cDNA
2.2.3 PCR扩增
2.2.4 目的基因片段连接中间载体pDONR221与重组子转化
2.2.5 菌落PCR
2.2.6 阳性菌提取质粒并测序
2.2.7 线性化中间载体与构建最终表达载体
2.2.8 质粒转化农杆菌
2.2.9 农杆菌介导的瞬时表达
2.2.10 蛋白的检测
2.2.11Quantitative Real-time PCR检测基因的表达量变化
2.3 结果与分析
2.2.1 RSMV M可以抑制双链GFP诱导的基因沉默
2.4小结与讨论
第三章 RSMV M与SGS3互作及RSMV编码蛋白的亚细胞定位分析
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 试剂
3.2 方法
3.2.1 表达载体的构建
3.2.2酵母双杂交（Yeast two-hybrid，Y2H）
3.2.3双分子荧光互补实验（Bimolecular fluorescence complement，BiFC）
3.2.4 亚细胞共定位（Subcellular Localization）
3.3 结果与分析
3.3.1 RSMV编码的M与SGS3互作
3.3.2 RSMV编码的其它蛋白定位在不同细胞器
3.4 小结与讨论
第四章 RSMV M影响SGS3的蛋白质稳定性
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 试剂
4.2 方法
4.2.1表达载体的构建
4.2.2Quantitative Real-time PCR检测相关基因的表达量
4.2.3 蛋白降解实验
4.3 结果与分析
4.3.1 M不影响水稻的SGS3及RNAi通路相关基因的转录
4.3.2 M影响SGS3蛋白质的稳定性
4.4 小结与讨论
第五章 RSMV M能够增强异源病毒表达载体PVX在本氏烟中的致病性
5.1 材料与方法
5.1.1 材料
5.1.2 试剂
5.2 方法
5.2.1 双酶切构建PVX异源表达载体
5.2.2连接中间载体pEASY-Blunt Zero
5.2.3 双酶切及连接PVX表达终载体
5.2.4 荧光定量PCR检测PVX病毒CP的表达量
5.2.5 DAB染色
5.2.6 台盼蓝染色
5.3 结果与分析
5.3.1 M能增强PVX在本氏烟中的致病性
5.3.2 M增强烟草中活性氧的积累
5.4 小结与讨论
第六章 RSMV M调控病毒病害症状的形成
6.1 材料与方法
6.1.1 材料
6.1.2 试剂
6.2 方法
6.2.1双酶切及构建过表达终载体
6.2.2 转基因水稻鉴定
6.3 结果与分析
6.3.1 M转基因过表达水稻呈现类似病毒病害症状的表型
6.4 小结与讨论
第七章 全文总结与讨论
参考文献
附录
1 引物
2 本研究所需要用到的相关溶液配制方法
攻读硕士学位期间的学术论文与研究成果
致谢
福建农林大学;
