建立人外周血单个核细胞来源的诱导多能干细胞

摘要

目的：　　诱导多能性干细胞（induced pluripotent stem cell，iPSCs）具有细胞来源广、可直接从病人自身获得、在体外可诱导分化为造血祖细胞的优点。本文探讨了如何建立了正常人外周血单个核细胞（PBMC）来源的诱导多能干细胞，为后期建立儿童遗传性血液病的诱导多能干细胞库奠定基础。　　方法：　　收集正常人外周静脉血，采用聚蔗糖－泛影葡胺（Ficoll-hypaque）密度梯度离心法分离外周血单个核细胞，后将含有OCT4、SOX2、KLF4和c-MYC四个转录因子的仙台病毒转染单个核细胞，最后使转染病毒后的单个核细胞接种于由小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）组成的饲养层细胞上，通过观察形态学变化、TRA1-60活体染色、RT-PCR对诱导多能干细胞进行检测。　　结果：　　外周血单个核细胞在转染仙台病毒后15天，干细胞样克隆开始逐渐形成，24天后可见大的圆形或椭圆形样、边界清晰的干细胞样克隆；细胞活体染色发现诱导多能干细胞可表达干细胞特异表面抗原TRA1-60，RT-PCR结果显示诱导多能干细胞可表达干细胞多能性相关基因Lin28、OCT4和Nanog。　　结论：　　将含有OCT4、SOX2、KLF4和c-MYC四个转录因子的仙台病毒转入人外周血单个核细胞，可以产生诱导多能干细胞，其形态特征与胚胎干细胞（ES）相似，可表达干细胞特异抗原TRA1-60，同时也表达干细胞多能性相关基因。这些结果为课题组后期建立儿童遗传性血液病诱导多能干细胞库以及同OP9系统共培养使其体外分化为造血祖细胞提供技术参考。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

1材料和方法

1.1材料

1.2试验方法

2 结果

2.1 正常人来源外周血单个核细胞培养

2.2仙台病毒转染外周血单个核细胞产生iPSCs

2.3 TRA1-60活体染色

2.4多能性相关基因表达

3讨论

全文总结

下一步研究计划：

参考文献

文献综述:诱导多能性干细胞在遗传性血液病中的应用与前景

致谢

硕士期间发表文章