酵母粉诱导重组人甲状旁腺激素表达研究

摘要

人甲状旁腺激素(Trx-hPTH)是人体内由甲状旁腺主细胞分泌的多肽类激素，具有调节钙磷平衡功能，由84个氨基酸组成，经研究发现它能够促进人体对Ca2+的重吸收和磷酸盐的排出，刺激软骨细胞和成骨细胞分裂，增加骨基质密度，是治疗骨质疏松症的蛋白药物。
　　 本文以大肠杆菌E.coli BL21(DE3)为宿主，pET32a为表达载体，进行人甲状旁腺激素的发酵表达，首先研究了在不同培养基中菌体生长和融合蛋白表达的特性，筛选出TB培养基作为发酵培养基，研究重组菌在摇瓶培养时的最佳发酵条件，选用LB培养基作为活化培养基，TB培养基作为发酵培养基，研究在不同培养条件下菌体浓度和目的蛋白表达量，优化发酵结果如下：用自来水配制培养基，pH为7，37℃下培养，活化培养5.5h后加诱导剂IPTG，IPTG终浓度为0.2mM，诱导3.5h时，Trx-hPTH的胞内蛋白量达到最大。
　　 同时在实验中发现不添加外源诱导剂时，目标蛋白也有表达，这与培养基中的酵母粉有关，本文对酵母粉的诱导规律进行研究，比较了三个品牌的酵母粉的诱导效果，三个品牌分别是BBI，Sangon，OXIOD，研究发现用不同的水源(蒸馏水和自来水)配制培养基，目标蛋白表达结果有差异，Sangon酵母粉在两种水源的培养基中都能表达，BBI在两种培养基中均不能表达，OXIOD酵母粉在蒸馏水的培养基中无明显表达，在自来水配制的培养基中表达显著。OXIOD酵母粉在浓度大于24g/l时能诱导大量目标蛋白表达。对OXIOD酵母粉进行分离，先后使用透析袋，不同的色谱柱进行分离。